191263. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hasnyálmirigy-eredetű, növekedési hormon kibocsátását elősegítő faktor előállítására
1 Í91 26 3 2 kát alkalmas csoportokkal védik. Szokásos módszer az is, hogy az a-aminocsoportot védik, amíg a karboxilcsoporton végbemenő reakció folyik, majd az a-aminocsoportot védő csoportot eltávolítják az ezen a helyen végzendő reakciók lehetővétételére, 5 Ennek megfelelően a reakció során képződik egy olyan intermedier molekula, amely az aminosavakat a pepiidnek megfelelő sorrendben tartalmazza, az aminosavak oldalláncaiban levő csoportok azonban védőcsoportokkal védett formában van- 10 nak. A fentiek alapján a találmány szerinti eljárás első lépésében előállítunk egy (II) általános képletű vegyületet, amelyben az aminosavak oldalláncaiban levő, könnyen reagáló csoportok védőcsoportok- 15 kai védett formában vannak: X1 - Tyr(X2) - Ala - Asp(X3) - Alá - Ile - Phe - Thr(X4) - Asn(X5) - Ser(X4) - Tyr(X2) - Arg(X6) - Lys(X7) - Val - Leu - D - Ala - Gin - (Xs) - Leu - Ser(X4) - Ala - Arg(X*) - Lys(X7) - Leu - Leu - 20 Gln(X5) - Asp(X3) - Ile - Met - Ser(X4) - Arg(Xe)- Gln(XJ) - GIn(X5) - Gly - [Q(X)]n - X8 (II) ahol n értéke 0 vagy I, 25 Q(X) jelentése az (I) általános képletnél Q jelentéseként megadott aminosavak kívánt esetben védett formában. X1 jelentése hidrogénatom vagy egy a-aminocsoportot védő csoport. Az X‘-el jelzett a- 30 aminocsoportot védő csoportok jól ismertek a polipeptidek lépésenként! szintézisének gyakorlatából. Az X’-el jelzett, a-aminocsoportot védő csoportok a következők lehetnek: (1) acii-típusú védőcsoportok, mint pl. formil-, 35 triíluor-acetil-, ftalil-, toluolszulfonil- (Tos), benzolszulfonil-, nitro-fenil-szulfenii-, tritilszulfenil-, o-nitro-fenoxi~acetil-, klór-acetil-, acetíl- és y-klór-butiril-csoport; (2) aromás uretán típusú védőcsoportok, mint pl. benzil- 40 oxi-karbonil-csoport (Z) és helyettesített Z, úgy mint p-nitro-benzil-oxi-karbonil, p-brómbenzil-oxi-karbonil-, p-metoxi-benzil-oxikarbonil-csoport; (3) alifás uretán-típusú védöcsoportok, mint pl. t-butil-oxi-karbonil- 45 (BOC), díízopropil-metil-oxi-karbonil-, izopropil-oxi-karbonil-, etoxi-karbonil, allil-oxikarbonil-csoport; (4) cikloalkü-uretán típusú védőcsoportok, mint pl. ciklopentil-oxikarbonil-, adamantil-oxi-karbonil- és ciklohe- 5C xil-oxi-karbonil-csoport (5) tiouretán-típusú védőcsoportok, mint pl. fenil-tiokarbonilcsoport; (6) aikil-típusú védőcsoportok, mint pl. trifenil-metil-(tritil), benzilesöpört; (7) trialkil-szílán csoportok, mint pl. trimetil-szilán- 55 csoport. A legelőnyösebb a-aminocsoportot védő csoport a BOC. X2 jelentése a Tyr fenolos hidroxilcsoportját védő csoport, amely tetrahidropiranil, tercier butil, tritíl, Bzl, CBZ, 4-Br-CBZ és 2,6-diklór- 60 benzil (DCB) csoportok valamelyike lehet. X2 lehet hidrogénatom is, amely azt jelenti, hogy a hidroxilcsoporton nincs védőcsoport. X3 jelentése hidrogén vagy egy észtert képző védőcsoport az Asp vagy a Glu karboxilcsoportján, amelyet benzil, 2,6-diklór-benzil, metil és etilcsoportok közül lehet kiválasztani. X4 jelentése védőcsoport a The vagy Ser hidroxilcsoportjain, amelyet acetil-, benzoil, tere.-butil-, tritil-, tetrahidropiranil-, Bzl, 2,6- diklór-benzil és CBZ csoportok közül lehet kiválasztaai. Az előnyös védőcsoport a Bzl. Az X4 lehet hidrogénatom is, amely azt jelenti, hogy nincs védőcsoport a hidroxilcsoporton. Xs jelentése hidrogénatom vagy védőcsoport az Asn vagy Gin oldalláncának aminocsoportjaihoz, és ez előnyösen xantil (Xan) csoport. X6 jelentése vagy védőcsoport az Arg guanidinocsoportjához, amelyet a nitro, Tos, CBZ, adamantil-oxi-karbonil- és BOC csoportok közül lehet kiválasztani, vagy hidrogénatom. X7 jelentése hidrogénatom vagy védőcsoport a Lys oldalláncának amino-szubsztituenséhez. Ilyen védőcsoportok lehetnek többek között - csak szemléltetés céljából felsorolva - a 2-klór-benzil-oxi-karbonil(2-Cl-Z), Tos, t-pentil-oxi-karbonil és BOC csoportok. Az oldallánc aminocsoportját védő csoport kiválasztása nem kritikus, kivéve azt a követelményt, hogy olyannak kell lennie, amely az a-arninocsoportokról történő védőcsoport eltávolításánál nem hasad le a szintézis során. Vagyis az a-aminocsoportot védő csoport és az oldallánc aminocsoportját védő csoport nem lehet azonos. X8 lehet védőcsoport a C-terminális karboxil esoporthoz, ilyenek lehetnek az X3-nál említett észter-képző csoportok, vagy jelölheti a gyantához rögzítő kötést. Lehet olyan eset is, amikor X8 nincs a molekulában, ez esetben a C-terminálisná! a maradéknak egy Y karboxil-része van. Amikor gyantát alkalmazunk rögzítő anyagként, az Y képlete a következő lehet : - O - CH2-gyanta, - O - Q32-benzilpoliamid gyanta, -NH- benzhidrilamin (BHA) gyanta, és - NH - para-metil-benzhidrilamin (MBHA) gyanta. A poliamid polimer gyanták kereskedelmi forgalomban kaphatók, ilyen gyanta alkalmazását ismertetik pl. a Bioorganic Chemistry, 8, 351 -370 (1979) irodalmi helyen, ahol ennek előnyös változatait is bemutatják egy szintézissel kapcsolatban. Hordozó gyantán végzett szintézis esetén az oldallánc-védő csoportokat először hidrogén-fluoridos (HF) kezeléssel lehasítjuk, majd ezt követően a pepiidet le lehet hasítani a gyantáról, mint egy amidol, ammonolízissel. Ha a helyettesítetlen amidra van szükség, a BHA vagy MBHA gyanta alkalmazása előnyös, mivel a hasítás közvetlenül megadja az amidot. Amennyiben N-metil-amidot kívánunk nyerni, ezt N-meti! BHA-gyantából lehet létrehozni. A köztes termékek képletében az X csoportok legalább egyikének védőcsoportnak kelt lennie, vagy X8-nak gyantának kell lennie. 3
