191250. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új pirazolo [1,5-a] piridin-származékok előállítására
5 191 250 6 számú vegyületeket a 2. példa szerinti eljárással állítjuk elő. Az eljárások hozamát, a kapott vegyületek olvadáspontját. az átkristályosításhoz alkalmazott oldószert és az elemzési eredményeket a 3. táblázatban ismertetjük. A találmány szerinti eljárás kiindulási anyagául szolgáló (II) általános képletéi vegyületet a megfelelő piridin-2-metanoI-származékból állíthatjuk elő. 1. referencia példa l-Amino-5-etil-2-/]iidroxi-metil/-piridinium-klorid előállítása 45,2 g hidroxil-amin-O-szulfát és 150 ml víz elegyéhez lassan, körülbelül 15 perc alatt hozzáadjuk 26,1 g kálium-hidroxid és 30 ml víz elegyét. Az elegyet az adagolás alatt sós-jég fürdőben 0-5 °C hőmérsékleten tartjuk és keveijük. A re akcióhegyhez ezután 50 ml vízben oldott 33,2 g 5-etil-2-piridin-metanolt adunk, és az elegyet 70 °C-ra melegítjük és 2 órán át ezen a hőmérsékleten tartjuk. Ezután az elegyet jégfürdőben hűtve pH-10 értékűre állítjuk be 27,6 kálium-karbonáttal, majd kloroformmal extraháljuk. A kloroformos fázist bepároljuk, így 19,5 g 5-etil-2-piridin-metanolt nyerünk viszsza. A lúgos vizes fázist pedig 20 ml tömény hidrogén-kloriddal pH = 1 értékűre állítjuk be, majd 100 °C-on szárazra pároljuk. A visszamaradó anyagot meleg etil-alkohollal extraháljuk és az etil-alkoholos extraktumot szárazra pároljuk. A maradékot kis mennyiségű etil-alkoholból átkristályosítjuk. így 30,7%-os hozammal 14,0 g kívánt terméket nyerünk halványsárga prizmák formájában. A kapott termék olvadáspontja 140-141 °C. Elemzési eredmények a CgH13N2OCl képlet alapján: számított: C% = 50,93, H% = 6,95, N% = 14,85; talált: C% = 50,81, H% = 7,05, N% * 14,68. 2. referencia példa l-Amino-2-hidroxi-metil-6-metil-piridinium-klorid előállítása 20,8 g 6-metil-2-piridin-metanolból az 1. referencia példa szerinti eljárással 3,5 g cím szerinti vegyületet - mely R1 * 3 * * * helyettesítőként 6-metil-csoportot tartalmazó (II) általános képletű vegyület — nyerünk. Az eljárás hozama 11,8%. A kapott termék olvadáspontja 163-164 °C. Elemzési eredmények a C^HuNjOCl képlet alapján: számított: C% = 48,15, H% = 6,35, N% = 16,09; talált: C% = 48,17, H% = 6,48, N% = 16,09. 1. vizsgálati példa SRS-A felszabadulását gátló hatás A találmány szerint előállított vegyületek SRS-A felszabadulását gátló hatását Orange és Moors [J. Immunoi., 116 392 (1976)] eljárásával határozzuk meg. Szenzitíwé tett tengerimalacok felaprított tüdődarabjaiból antigén hatására felszabadult SRS—A biológiai vizsgálatát tengerimalac ileumon végezzük Brocklehurst [J. Physiol., 151, 416 (I960)] eljárása szerint. A vizsgálandó vegyületeket tüdő-darabokkal előzetesen inkubáljuk, ezután tesszük ki azokat antigén-hatásnak. Mint az 1. táblázatban látható, a találmány szerint előállított vegyületek már meglehetősen alacsony koncentrációban gátolják az SRS-A felszabadulását. A referencia vegyületként alkalmazott fenidon [l-fenil-3- -pirazolidon, melynek kémiai szerkezetét az (A) képlet mutatja] aktivitása 2-10-szer gyengébb, mint a ta-4 lálmány szerint előállított vegyületeké. 1. táblázat Vegyület száma SRS-A felszabadulást gátló hatás IC50*[.10'6 g/ml] 1. 0,55 2. 1,4 3. 0,63 4. 3,5 5. 1,8 6. 2,4 7. 1,0 8. 1,7 9. 1,0 10. 1,7 11. 0,70 12. 0,52 13. 0,88 14. 0,53 15. 1,2 16. 1,9 17. 1,5 20. 2,4 fenidon 6,3 *A vizsgált vegyületnek az a koncentrációja, mely az SRS-A felszabadult 50%-os mértékben gátolja. 2. vizsgálati példa Arachidonsav metabolizmusra kifejtett hatás A találmány szerint előállított vegyületek hatását az 1- jelzett exogén arachidonsav metabolizmusra lényegében Harvey és Osborne [J. Pharmacol. Methods 9, 147 (1983)] eljárásával, A23187 kalcium ionoforral stimulált tengerimalac hashártya neutrofilek alkalmazásával határozzuk meg. Ezzel az eljárással a neutrofilek fő metabolitként 5-hidroxi-ikozatetraénsavat (5-lipoxigenáz termék) és 12-hidroxi-5,8,10-heptadekatriénsavat (dklooxigenáz termék) képeznek, ilymódon lehetőség nyílik arra, hogy a gyógyszer hatását egyidejűleg vizsgáljuk az arachidonsav metabolizmus mindkét útjára. Mint az a 2. táblázatból látható, a találmány szerint előállított vegyületek az 5-lipoxigenáz termékek szintézisét gátolják anélkül, hogy a dklooxigenáz reakcióutat érintenék. E vegyületek 5-lipoxigenáz gátló hatása néhányszor nagyobb; mint a fenidoné. Közismert, hogy az SRS-A arachidonsavból szintetizálódik az 5-lipoxigenáz reakcióúton. Ennek folytán azt a következtetést vontuk le, hogy a találmány szerint előállított vegyületek 5-lipoxigenáz inhibitorként hatnak az SRS-A felszabadulásra. 2. táblázat Az arachidonsav metabolizmusra gyakorolt hatás Vegyü- Koncentrádó let (/uM) száma Gátlás % 5-Lipoxigenáz dklooxigenáz 0,1 20,3 0 5. 1.0 86,6 0 —^ ro O O í r-62,0 0 84,0 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
