191134. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hőálló alfa-amiláz enzim előállítására
5 191 134 6 0,025 mólos kalcium-klorid-oldat 11,1 g kémiailag tiszta, vízmentes kalcium-kloridot feloldunk 4 liter vízben. Puffer-oldat 25,3 g szemcsés nátrium-hidroxidot és 340 g kálium-dihidrogén-foszfátot feloldunk desztillált vízben, és az oldat térfogatát egy méfőlombikban 2 literre egészítjük ki. Amikor a puffer-oldat eléri a szobahőmérsékletet, végső térfogatára hígítjuk (pH = 6,2 ±0,1). Jód-törzsoldat 5,50 g kémiailag tiszta, kristályos jódot és 11,0 g kálium-jodidot feloldunk vízben, és az oldatot 250 m! térfogatra hígítjuk. Az oldatot sötét színű üvegben tároljuk. Híg jód-oldat 20,0 g kálium-jodidot feloldunk vízben, hozzáadunk 2,00 ml jód-törzsoldatot, majd 500 ml térfogatra hígítjuk. Az enzim likvefon/ml egységeben kifejezett aktivitásának meghatározására a fentiekben leírt eljárást használva, a jelen találmány szerinti eljárással előállított enzim aktivitása meghaladja az 1000 likvefon/mlt és legtöbbször eléri az 1500 - 2000 likvefon/ml t. Az említett brit szabadalmi leírásban ismertetett Bacillus licheniformist a fentiekben leírt fermentációs közegben tenyésztve, és az enzim aktivitását ugyancsak a fentiekben leírt módon meghatározva, az enzim aktivitása átlagosan 125 likvefon/ml volt, míg ugyanez a tenyészet az említett brit szabadalmi leírásban ismertetett táptalajban tenyésztve még alacsonyabb, 50 likvefon/ml alatti áktivitást eredményezett. Az alfa-amiláz enzim aktivitását az említett brit szabadalmi leírásban ismertetett, módosított SKB- eljárással [SKB eljárást lásd Cerial Chemistry 16; 712-723 (1939)] is meghatározhatjuk. E módszert alkalmazva az említett brit szabadalmi leírásban ismertetett tenyészetek 500 SKB-egység/ml enzim-aktivitást termeltek, míg a jelen találmány szerinti tenyészetben az enzim aktivitása körülbelül 10 000 SKB- egység/ml volt. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás hőstabil alfa-amiláz enzim előállítására, azzal jellemezve, hogy Bacillus licheniformis ATCC 39326 jelzésű törzset 1 — 25 tömeg% szénforrást, így laktózt, glükózt, keményítőt, szóját, kukoricalisztet, vagy ezek keverékét és nitrogénforrást, így oldható nitrátokat, ammóniumsókat, élesztőkivonatot, kukoricalekvárt, földimogyorólisztet tartalmazó táptalajban tenyésztjük, és az alfa-amiláz enzimet kívánt esetben elkülönítjük a táptalajtól ; a táptalaj pH-ját pedig előnyösen 8 és 5,5 között tartjuk. 2. Az l. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az alfa-amiláz enzimet elkülönítjük a táptalajtól. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a Bacillus licheniformis ATCC 39326 jelzésű törzset egy szénforrásként laktózt tartalmazó táptalajba tenyésztjük. 4. A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a laktóz mennyisége a táptalajban 5 vegyes% és 15 vegyes % között van. 5. A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az alfa-amiláz enzimet elkülönítjük a táptalajtól. 6. A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az említett táptalaj pH-ját 8 alatt, de 5,5 fölött tartjuk. Rajz nélkül Kiadja az Országos Találmányi Hivatal A kiadásért felel: Himer Zoltán osztályvezető Megjelent: a Műszaki Könyvkiadó gondozásában COPYLUX Nyomdaipari és Sokszorosító Kisszövetkezet
