191108. lajstromszámú szabadalom • Eljárás M 9026 jelű antibiotikum-komplex komponensek előállítására
13 191 108 14 Az így kapott oldatot, 30 g Kiesel-gélből (70-230 mesh ASTM, Merck) 9:1 térfogatarányú diklórmetán: metanol elegyben készített szilikagél kromatográfiás oszlopra visszük. Ugyanezt az clcgvcl használjuk az oszlop előhívására, 15 ml-es frakciókat szedünk. Az oszlopról lejövő minden egyes frakciót megvizsgálunk HL 60 sejtek, Staphylococcus aureus vagy Bacillus subtilis-szal szembeni aktivitásra, vagy vékonyréteg kromalográfiával, illetve vékonyrétegkromatográfiás bioautográfiával, kimutató organizmusként Staphylococcus aureust vagy Bacillus subtilist alkalmazva. A frakciókat a komponens-tartalom és a mutatott aktivitás alapján egyesítjük. Minden egyesített frakciót csökkentett nyomáson besűrítünk. Minden sűrítményt etiléterhez adunk a kívánt komponens kicsapására. Az eljárás alapján egymás után három Tő komponenst lehet elválasztani, melyeket 1., 2. és 3. komponensnek nevezünk. Fizikai-kémiai tulajdonságaikat az előbbiekben leírtuk. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás M 9026 antibiotikum komplex, melynek nujolban felvett infravörös elnyelés spektrumában 3260 (széles), 3060, 2730, 1735, 1720 (váll), 1650, 1630, 1545, 1515, 1495, 1300, 1260, 1210. 1170. 1090, 1030, 980, 940, 830, 760, 720 és 700 cm 1 -nél található elnyelési maximum, valamint az M 9026 antibiotikum 1. komponense, melynek olvadáspontja 235 °C, nujolban felvett infravörös elnyelési spektrumában 3670, 3550, 3460, 3320, 3100, 3080, 3040, 2740, 1720, 1660, 1630, 1545, 1500, 1260, 1245, 1220, 1190, 1140, 1090, 1040, 985, 950, 895, 750, 725 és 700 cm'1 -nél található elnyelési maximum, és mágneses magrezonancia spektruma az alábbi jellegzetes csúcsokat mutatja: delta 0,70-0,73 (2d, 6H, J=6,5), 0,83 (d, 6H, J=7), 1,0-2,0 (m, 4H), 1,06 (m, 1H), 1,24 (d, 3H, J=6,5), 1.5- 2,0 (m, 211), 1,66 (t sept, 11I, J=7,5), 1,98 (ddd, 2JJ, J=7,5-7,5-l), 2,49 (ddd, 111, 111, J==7—10; 2,5), 3,00 (d, 2H, J=7,5), 3,91 (dddd, 1H, J=9; 8; 2.5- 9,5), 4,08 (dd, 1H), 4,32 (ddq, 1H; J=2,5-10), 4,57 (dt, 1H; J=8), 5,69 (dt, 1H, J=15), 6,15 (d, III), 6,22 (d, III), 6,73 (dt, III), 7,18 (m, 511). az M 9026 antibiotikum 2. komponense, melynek olvadáspontja 280 °C fölött van, nujolban felvett infravörös elnyelési spektrumában 3340, 3295, 3070, 2730, 1720, 1670, 1655, 1630, 1540, 1500, 1270, 1240, 1215, 1190, 1140,1090,1040,980,945,760, 720 és 700 cm'1 -nél található elnyelési maximum, és mágneses magrezonancia spektruma az. alábbi jellegzetes csúcsokat mutatja: delta 0,78 (d, 611, J=7), 0,87-0,90 (2d, 611, J=6,5), 1,4-2,0 (m, 811), 1,24 (d, 3H, J=6,5), 1,27 (d, 3H, J=7), 1,92 (ddd, 2H, J= =7,5—7,5—1), 2,60 (ddd, 1H, J=2,5-711), 3,27 (dq, 1H, J=9), 4,08 (dddd, 1H, J=9-9-2), 4,14 (dd, 1H), 4,38 (ddq, III, J =2—11), 4,54 (dd, III, J=8), 5,62 (dt, 1H, K=I5), 6,13 (d, lH),6,60(dt, Ili), 7,23 (m, 5H), 7,27 (d, 1H), és/vagy az M 9026 antibiotikum 3. komponense, melynek olvadáspontja ~l 10 °C, CI)CI3-bau felvett infravörös elnyelési spektrumában 3700, 3610, 3420, 3300, 3040, 2960, 2935, 2880, 1730, 1665, 1635, 1600, 1500, 1455, 1435, 1370, 1275, 1235,1200 és 1170 cm'1-nél található elnyelési maximum, és mágneses magrezonancia spektruma az alábbi jellegzetes csúcsokat mutatja: delta 0,88 (d, (>11, 1=7), 0,91- 0,94 (2d, 6H, J =7), 1,4-2,0 (m, 811), 1,16 (d, 311, J=6,5), 1,31 (d,3H,J=7), 1,99 (ddd, 2H,J=7-7 -I), 2,49 (ddd, 111, J=2,5; 7-11), 3,07 (b, lH),3,34(dq, 1H, J = 8), 3,68 (s, 3H), 3,70 (m, 1H),3,75 (dd, 1H, J=10), 3,88 (b, 1H), 4,01 (dddd, J=9, J=2-l 1), 4,54 (dd, 1H, J=9), 5,62 (dt, 1H, J=15), 6,16 (d, 1H), 6,52 (d, III), 6,65 (dt. Hl), 7,27 (m, 511) előállítására, azzal jellemezve, hogy a Micromouospora sp. NRRL 15 118 jelű törzset vagy annak valamely mutánsát vagy variánsát süllvesztett-levegőzetetett fermentációs körülmények között, asszimilálható szénforrást, nitrogénforrást és szervetlen sókat tartalmazó vizes tápközegben tenyésztjük, majd az említett antibiotikum komplexet kinyerjük és kívánt esetben izoláljuk az 1,2,3 jellel ellátott M 9026 antibiotikum 1., 2. és/vagy 3. komponenseket. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a fermentációt 26 °C és 30 °C között végezzük. 3. Az I. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a fermentációt plI 6,0 cs 8,5 közölt végezzük. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a fermentáció végén az antibiotikumot szerves oldószerrel, például rövidszánláncú alkoholokkal, rövidszénláncú halo-alkánokkal, rövidszénláncú alkil-észterekkel vagy rövidszénláncú alkil-ketonokkal történő extrakcióval nyerjük ki a fermentléből. 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a fermentáció végén az antibiotikumot szerves oldószerrel, például rövidszénláncú alkoholokkal, rövidszénláncú halo-alkánokkal, rövidszénláncú alkil-észterekkel vagy rövidszénláncú alkil-ketonokkal történő extrakcióval nyerjük ki a fermentléből, miután a szőriét pH-ját pH 3,5 és 8,5 közé állítottuk. 6. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a fermentáció végén az antibiotikumot szerves oldószerrel, például rövidszénláncú alkoholokkal, rövidszénláncú alkil-észterekkel vagy rövidszénláncú alkil-ketonokkal történő extrakcióval nyerjük ki a fermentléből, miután a szűrlet pH-ját 6,0 és 7,5 közé állítottuk. 7. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a fermentáció végén az antibiotikumot etil-acetáttal extraháljuk a fermentléből. 8. Az I. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az M 9026 antibiotikum 2. és 3. komponensét szokásos kromatográfiás technikákkal külön izoláljuk. 9. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az M 9026 antibiotikum 2. és 3. kompo5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 8
