191085. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3-(5'-ribonuleotid)-származékok előállítására
11 191 085 12- I DEAE-Sephadex acetát-formájú gyantát, melyet a fentebb leírt módon készítünk, 0,03M THAM-acetát pufferoldattal (pH 8,0) átmosunk, majd egy üvegoszlopba tömörítjük (belső átmérő 4,5 cm, magasság 40 cm) hidrosztatikus nyomás segítségével. Az ADA-71.1 készítményt (lásd fentebb) 10 ml 0,03M THAM-acetát puffer-oldatban (pH 8,0) feloldjuk, és az oszlop tetejére öntjük. Az oszlop eluálása a következőként történik. 1. 0,03M THAM-acetát, pH 8,0 (1—79 frakciók); 2. 0,12M THAM-acetát, pH 8,0 (80-395 frakciók); 3. 0,25M THAM-acetát, pH 8,0 (396 -750 frakciók); 20 ml térfogatú frakciókat gyűjtünk, és elemezzük egyrészt UV segítségével, másrészt megvizsgáljuk biológiai hatékonyságukat alkálikus foszfatázzal végzett kezelés előtt és után Az 51-60 frakciók 3-(adcnozin-5'foszfát)- U-57 930-cl, a 62 73 frakciók (ADA-94.B) 3-(uridin-5'-foszfát)- U-57 930-ot, a 75-110 frakciók pedig 3-(guanozin-5'-foszfát)- U-57 930-ot tartalmaznak. Lényegében tiszta 3-(uridin-5'-foszfát)- U-57 930 elkülönítése; a THAM-acetát puffer eltávolítása Amberlitc XAD-2 kromatográfiával: Oszlopot készítünk 50 ml Amberlite XAD-2 gyantából. Az ADA-94B gyűjtést, mely 3-(uridin-5'-foszfát)- U-57 930-ot tartalmaz, 2 ml/perc sebességgel vezetjük át az oszlopon. A lecsepegő folyadékot elvetjük. Az oszlopot átmossuk 200 ml vízzel, és ezt a mosófolyadékot is elvetjük. Ezután az oszlopot metanol és víz 70—30 arányú elegyével eluáljuk. A 3-(uridin- 5-foszfát)- U-57930-t tartalmazó frakciókat (ennek megállapítása UV segítségével történik) egyesítjük (200 ml) vizes oldattá töményítjük, és liofilizáljuk. így kapjuk a 60 mg súlyú ADA-95.1 jelű készítményt. A 3-(uridin-5'-foszfát)- U-5 7 930 jellemzése 1. Az IR színkép adatai Az IR színkép elnyelési sávjai (Nujol és Kbr) a következők: a) Nujol Sávfrekvencia Erősség Típus Sávfrekvencia Erősség Típus 3417,3 24 SH 1249,0 33 SH 3341,1 19 BRD 1214,3 21 AVG 3211,8 19 BRD 1146,8 42 SH 3108,6 25 BRD 1080,9 15 BRD 2951,4 2 BRD M 1070,6 12 AVG 2926,3 1 BRD M 1056,1 14 SH 2854,9 2 BRD M 992,4 39 AVG 2729,6 48 BRD M 972,2 29 AVG 2693,9 51 SH 955,8 49 SH 2535,7 65 SH 930,7 51 AVG 1649,3 8 AVG 889,2 36 AVG 1610,7 26 AVG 860,3 52 AVG 1575,0 35 AVG 849,7 53 AVG 1528,7 31 AVG 804,4 46 SH 1489,2 23 AVG 788,9 40 AVG 1462,2 9 AVG M 721,4 44 AVG M 1404,3 41 BRD 705,0 47 BRD 1377,3 18 AVG M 654,9 45 SH 1368,6 31 SH M 632,7 38 AVG 1286,6 34 AVG Magyarázat a Táblázathoz: Sávfrekvencia: hullámhosszban (cm-1) Erősség: a transzmittancia százalékában {% T). A csúcs környezetére vonatkozó adatok: BRD jelentése széles; AVG jelentése átlagos; SHP jelentése éles; SH jelentése vállas. M jelentése: lehetséges, hogy az ásványolaj zavar. A 25 legerősebb csúcs %T Frekvencia %T Frekvencia 1 2926,2 24 3417,2 2 2951,3 25 3108,5 2 2854,8 26 1610,6 8 1649,2 31 1528,6 9 1462,1 31 1368,5 12 1070,5 33 1249,0 14 1056,0 34 1286,5 15 1089,8 35 1575,0 18 1377,2 36 889,1 19 3341,0 38 632,6 19 3211,7 39 992,3 21 1214,2 39 972,1 23 1489,1 Előkészítés: eldörzsölés ásványolajjal. Max% T : ; 87 @ 1848.0 %T 3800 cm-Lnél: 83 Sűrűség (cm-1/pt): 0,964 b) KBr Sáv-Erős- ^, Sáv- Erősfrekvencia ség Ilpus frekvencia ség llpus 3408,6 10 BRD 1088,9 12 BRD 3102,8 26 SH 1071,5 9 AVG 2963,9 28 AVG 1057,1 11 SH 2930,2 27 BRD 992,4 35 AVG 2878,1 37 AVG 972,2 36 AVG 2862,7 39 SH 956,8 45 SH 2768,1 51 SH 928,8 48 AVG 2511,6 65 BRD 889,2 32 AVG 1649,3 4 AVG 859,3 47 AVG 1614,6 20 SH 851,6 47 SH 1576,0 30 AVG 804,4 39 SH 1528,7 28 AVG 788,9 34 AVG 1491,1 21 AVG 743,6 47 SH 1462,2 33 AVG 705,0 40 AVG 1450,6 35 SH 654,9 39 SH 1404,3 37 AVG 634,6 35 AVG 1384,0 33 AVG 595,1 33 AVG 1360,9 42 SH 572,9 33 AVG 1286,6 32 AVG 525,6 32 AVG 1251,9 30 SH 447,5 36 AVG 1215,2 18 AVG Magyarázat a Táblázathoz: Sávfrekvencia: hullámszámban (cm-1) Intenzitás: a transzmittancia százalékában (%T) 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
