190973. lajstromszámú szabadalom • Eljárás GRF-analógok előállítására
1 190 973 2 kation-cserélő kromatográfiának és megoszlási kromatográfiának vetjük alá. Az oGRF(1^44)amid optikai forgatóképessége: [a]D = -62±T (c = 1,1%-os ecetsavban), az oGRF(1^44) szabad sav [a]D-értéke = - 64 ± 1° (c = 1,1%-os ecetsavban). A fenti, C-terminális végén szabad savat tartalmazó peptid előállítására az 1. példában leírt eljárás szerint klór-metilezett gyantával megismételjük a szintézist. 6. példa A peptid növekedési hormon kibocsátására gyakorolt hatásának meghatározására in vitro vizsgálatokat végzünk a 2. példában leírt módon, közvetlenül összehasonlítva ekvimoláris koncentrációban a szintetikus hGRF(l-44)—NH2-t az 5. példában leírt szintetikus oGRF(l-44)—NH2-vel. Az összehasonlító vizsgálat eredményei azt mutatják, hogy az oGRF(l-44)-nek azonos a biológiai aktivitása a szintetikus pepiidével, és közel azonos a potenciálja. Többfaktoros kísérleti elrendezésben, több dózisban vizsgálva az oGRF a hGRF(l-44)—NH2-vel azonos aktivitással rendelkezik, specifikus aktivitása körülbelül 70%-a a hGRF(l^M)—NH2-nek. A szintetikus pGRF, bGRF és oGRF peptidek haszonállatoknak, különösen sertéseknek, marháknak, kecskéknek és juhoknak, vagy más meleg vérü állatoknak történő folyamatos adagolása fokozza a beépítő folyamatokat (anabolizmus), és így az izomtömeget figyelembe véve növeli a testsúlyt. Az állatorvosi gyakorlatban az az ideális, ha az adott faj GRF-jét használjuk, például oGRF-et a juhoknál, bGRF-et a szarvasmarháknál és kecskéknél, hiszen a beinjektált, vagy más módszerrel bevitt molekulának nincsenek antigén tulajdonságai, mivel ugyanahhoz a fajhoz tartozik, mint a kezelt állat. A tejtermelést is növeli a faj nőstény állatainál. Használata a haltenyésztésben és más hideg vérű tengeri állatok nevelésében, a növekedés meggyorsításában fontos. Állatok kezelésében általában az állatgyógyászatban elfogadott szilárd vagy folyékony hordozóanyag kombinációját használjuk, melyet az alkalmazás alapján elterjedten gyógyászati készítménynek hívnak. A szintetikus GRF-et gyógyászati készítmény előállítása céljából elfogadható hordozóanyaggal kombinálva a készítményt emlősöknek intravénásán, szubkután, intramuszkulárisan, intranazálisan vagy orálisan adagoljuk. A dózis nagysága változik, a kezelt állapottól, az állapot súlyosságától és a kívánt kezelés időtartamától függően. Ha az aktív anyagot tabletta formájában adagoljuk, a tabletta tartalmazhat kötőanyagot, pl. tragantmézgát, kukoricakeményítőt vagy zselatint; egy dezintegráló anyagot, pl. alginsavat; és csúsztató anyagot, pl. magnézium-sztearátot. Ha folyékony formában kell adagolni, édesítő- és/vagy ízesítőanyagot használhatunk, az intravénás adagolást izotóniás sóoldatban, foszfát-pufferben vagy hasonló folyadékban végezhetjük. A peptideket orvosi felügyelet mellett kell adagolni és a gyógyászati készítmények a pepiidet általában szokásos, gyógyászatilag elfogadott hordozóval együtt tartalmazzák. A dózis nagysága általában 20-2000 nanogramm peptid testsúlyk.l* - grammra számítva. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás az H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-R13-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser- Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-R28-Arg- Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Gly-Ala- R41-Val-Arg-Leu-Y (I) általános képletü vegyület előállítására, ahol R13 jelentése Valin vagy izoleucin; R28 jelentése szerín vagy aszparagin; R4t jelentése arginin vagy lizin, Y jelentése hidroxil- vagy aminocsoport, azzal jellemezve, hogy valamely (II) általános képletü, X1- Tyr(X2)-Ala-Asp(X3)-Ala-Ile-Phe-Thr(X4)-Asn- Ser(X5)-Tyr(X2)-Arg(X6)-Lys(X7)-R,3-Leu-Gly- Gln-Leu-Ser(X5)-Ala-Arg-(X6)-Lys(X7)-Leu-Leu- Gln-Asp(X3)-Ile-Met-R28(X5)-Arg(X6)-Gln-Gln- Gl>-Glu(X3)-Arg(X6)-Asn-Gln-Glu(X3)-Gln-Gly- Ala-R41(X6 vagy X7)-Val-Arg(X6)-Leu-X8, (II) ahol X,, X2, X3, X4, X5, X6 és X7 hidrogénatom vagy a peptidkémiában ismert védőcsoport, és X„ jelentése amid-, hidroxil- vagy védőcsoport, — O—CH2-gyanta vagy —NH-gyanta - ahol a „gyanta” a szilárd fázisú peptidszintézisnél önmagában ismert gyantahordozót jelent - és ezen csoportok legalább egyike védőcsoportot jelent, vegyületről a védőcsoportot vagy védőcsoportokat a peptidkémiában önmagában ismert módon lehasítjuk (Elsőbbsége: 1984. 08. 28.) 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás olyan (I) általános képletü vegyület előállítására, ahol R2g jelentése aszparagin, R41 jelentése lizin, és R13 és Y az 1. igénypontban megadott, azzal jellemezve, hogy olyan védett (II) általános képletü vegyületből indulunk ki, melyben R2g és R4, a fent és Ru és Y az 1. igénypontban megadott. (Elsőbbsége: 1983. 10. 12.) 3 A 2. igénypont szerinti eljárás olyan (I) általános képletü vegyületek előállítására, ahol R28 és R4I a 2. igénypontban, Y az 1. igénypontban megadott és R13 jelentése izoleucin, azzal jellemezve, hogy olyan védett (II) általános képletü vegyületből indulunk ki, melyben R28 és R41 a 2. igénypontban, Y az 1. igénypontban és R13 a fent megadott. (Elsőbbsége: 1984. 03. 12.) 4 A 2. igénypont szerinti eljárás olyan (I) általános képletü vegyület előállítására, ahol R28 és R41 a 2. igénypontban, Y az 1. igénypontban megadott és R13 jelentése valin, azzal jellemezve, hogy olyan védett (II) általános képletü vegyületből indulunk ki, melyben R28 és R4I a 2. igénypontban, Y az 1. igénypontban és Ri3 a fent megadott. (Elsőbbsége: 1983. 10. 12.) 5 Az 1. igénypont szerinti eljárás olyan (I) általános képletü vegyület előállítására, melyben Y az 1. igénypontban megadott, R13 jelentése valin, R28 jelentése szerin és R41 jelentése arginin, azzal jellemezve, hogy olyan védett (II) általános képletü 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
