190915. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új tripeptid-származékok előállítására
7 190.915 8 szőlőcukrot vagy nátrium-kloridot, hogy a steril közeg hozzáadása után izotóniás oldatot vagy szuszpenziót kapjunk. Előnyösen használható készítmények még azok, melyek szájon át történő adagolásra alkalmasak. Ezeket külön egységekben állíthatjuk elő, az aktív adalékból előre meghatározott mennyiséget tartalmazó kapszulák vagy tabletták formájában. Előállíthatjuk por vagy granulátum formájában, vizes vagy nem vizes közegben, oldatként vagy szuszpenzióként vagy emulzióként. A tablettát általában egy vagy több kiegészítő adalékanyaggal sajtolva állíthatjuk elő. A tabletták előállítása során az aktív adalékanyagot szabadonfolyó formában, úgymint por vagy granulátum, általában egy vagy több adalékanyaggal, úgymint kötőanyagokkal, csúsztatókkal, semleges hígítóanyagokkal, kenőanyagokkal, felületaktív anyagokkal, pufferokkal, illatanyagokkal, vastagítókkal, konzerválószerekkel vagy adagolóanyagokkal keverve sajtolással készítik. A találmány szerinti vegyületek legmegfelelőbb dózisát orvosok határozzák meg. A kiválasztott dózisok az adagolás módjától, az éppen adagolt hatóanyagtól, a kezelés alatt álló betegtől és a kezelés módjától függenek. Parenterális adagolás esetén azonban a dózis általában 0,1 fig-2 mg/testsúlykilogramm között változik, előnyösen 10-100/rg/testsúly-kilogramm között változik intramuszkuláris vagy szubkután adagolás esetén, intravénás adagolás esetén 0,1 /zg-200 /rg/testsúly kilogramm között, előnyösen 1 //g-50 ^g/testsúlykilogramm között változik. Szájon át történő adagolás esetén a dózis 100 pg- 100 mg között változik a befogadó testsúlykilogrammjára számítva, előnyösen 500 ^g-50 mg/testsúlykilogramm, még előnyösebben 1 mg-10 mg/testsúlykilogramm között. A találmány különböző szempontjainak további bemutatására a következő, nem korlátozó jellegű példákat adjuk meg. 1. példa L-Tirozil-D-alanil-N-(2-oxo-l-benzil-propil)-glicin-amid acetát só előállítása A) 3-(íerc-butiloxi-karbamido)-4-fenilbután-2-on. 15,9 g (0,06 mól) Na-íerc-butiloxi-karbonil-L-fenilalanin 100 ml vízmentes éterben, szobahőmérsékleten kevert oldatához nitrogén-atmoszféra alatt, 13,0 ml (0,13 mól) 1 A-metil-lítiumot adunk cseppenként, 30 perc alatt. A kapott keveréket további 6 órán át keverjük szobahőmérsékleten, majd cseppenként 25 ml vizet adunk hozzá. A reakcióelegyet vízzel és etilacetáttal hígítjuk, majd a kapott keveréket választótölcsérbe helyezzük. Az etilacetátos réteget elválasztjuk, és 1,5 n citromsavval, majd vízzel mossuk. Az etilacetátos oldatot vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk, és csökkentett nyomáson besűrítve olajat kapunk. Az olajat 10x2 cm-es, Grace and Davidson 62 minőségű szilikagél diklórmetános szuszpenziójából készült oszlopra visszük. Az oszlopot lépcsőzetes diklórmetán-kloroform gradienssel eluáljuk (diklórmetán - diklórmetán:kloroform 50:50 elegye). A kapott leoldott frakciókat a vékonyréteg-kromatográfiás (TLC) profil alapján egyesítjük. Az oldószer lepárlása után 2,8 g (az elméleti termelés 18%-a) olajat kapunk. [aß5-7,45° (c = 0,5; MeOH) A) C15H,,NO, (263,3)-ra számított elemanalízis: számított: C = 68,42%, H = 8,04%, N = 5,32%; mért: C = 68,14%, H = 7,86%, N = 4,93%. B) 3-amino-4-fenilbután-2-on sósavas sója Az A) pontban előállított terméket (4,4 g, 16,7 millimól) 1,0 A sósavat és 5 ml anizolt tartalmazó 50 ml jégecetben oldjuk. Az elegyet szobahőmérsékleten 30 percig kevertetjük, majd etiléterbe öntjük. A kapott csapadékot összegyűjtve és szárítva 3,1 g (93%) címbeli vegyületet kapunk, olvadáspontja 131-134°C. [aß5 + 34,36° (c = 0,5; MeOH) A CinHl4NOCl (199,7)-re számított elemanalízis: számított: C = 60,15%, H = 7,07%, N = 7,01%; mért: C = 60,38%, H = 7,02%, N = 7,06%. C) N"-ferc-butiloxi-karbonil-L-tirozil-D-alanil-N(2-oxo-l-benzil-propil)-glicinamid 2,96 g, 0,5 mmól N"-Boc-L-Tyr-D-Ala-Gly-diciklohexil-ammónium-sót szuszpendálunk 20 ml DMF- ben, majdazelegyet-15°C-rahűtjük. 4cseppNMM- et és 0,66 ml (0,5 mmól) IBCF-et adunk gyorsan a kevert, hűtött oldathoz. A következő előállítás során az oldatot -15 °C-on keverjük. A B) pontból származó terméket (1 g, 0,5 mmól) 5 ml DMF-ben oldjuk. Az elegyet 0 °C-ra hűtjük, és 0,55 ml (0,5 mmól) NMM-et adunk hozzá egy részletben. A kapott elegyet keverve biztosítjuk a reakció teljes lejátszódását. Az elegyet ezután gyorsan a fentiekben elkészített oldathoz adjuk, majd az újonnan keletkezett keveréket 4 órán át-15 °C-on keverjük. A keveréket ezután lassan, körülbelül két nap alatt hagyjuk szobahőmérsékletre melegedni. A kapott csapadékot szűréssel eltávolítjuk, és a szürletet csökkentett nyomáson bepárolva olajat kapunk. Az olajat etilacetát és 1 n vizes nátrium-hidrogén-karbonát elegyében oldjuk. A szerves fázist elválasztjuk és egymás után mossuk vízzel, 1,5 n citromsavval, majd vízzel. Az etilacetátos fázist vízmentes magnéziumszulfáton szárítjuk, majd csökkentett nyomáson besűrítve 2,3 g címben szereplő vegyületet kapunk olaj formájában. D) L-tirozil-D-alanil-N-(2-oxo-l-benzil-propil)gli cinamid- ace tátsó j a \ C) pontból származó terméket (2,3 g) 15 ml, 3 inl anizolt tartalmazó trifluorecetsavban oldjuk. A7 elegyet 0 °C-on 30 percig keverjük, majd liofilezzük. A kapott szilárd anyagot 22% acetonitrilból és 0,1 n ammónium-acetátból álló pufferben oldjuk és ugyanezzel a pufferrel egyensúlyba hozott fázisú szilikagélből készült 4x70 cm-es oszlopra visszük. Az eluátumot 280 nm-en ellenőrizzük. A megfelelő frakciókat egyesítjük, és liofilezés után 773 mg (37%), a címben szereplő vegyületet kapunk fehér por formájában. [ajy5 + 68,97° (c = 0,5; 1 n HC1) A C26H34N407 (514,6) összegképlet alapján számított elemanalízis: számított: C = 60,69%, H = 6,66%, N = 10,89%; mért: C = 60,50%, H = 6,80%, N = 10,93%. Aminosav-elemzés: Tyr = 0,99, Alá = 1,01, Gl) = 0,99, NH, = 0,21. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 5
