190803. lajstromszámú szabadalom • Ráksejt elleni limfociták, valamint rákellenes hatóanyagok előállítására, amelyek az említett limfociátkat tartalmazzák
1 190 803 2 úgy, mint az 5. teszt példában. A célsejtek a 51Cr-rel , jelzett X5563-sejtek voltak. Kontroll limfocitákként az 5. példa szerinti limfocitákat használjuk, kivéve, hogy a lépsejtek érzékennyé tételét 1 x 105/ egységenkénti mitomicin C-vel kezelt X5563 sejttel 5 végezzük (5 x 10®/ml X5563 sejtet 50 pg/ml mitomicin C-vel kezelünk 60 percig) a GRA-M-5 helyett. Az eredményt a 13. táblázat tartalmazza. 10 13. táblázat Specifikus 51 Cr felszabadulás (%) GRA-M-5-K-T-1 12,7 6,3 5,7 GRA-M-5-K-T-2 18,4 20,6 13,7 Kontroll 0,0 0,0 0,0 8. Teszt példa (H-2 próba) 25 A 2. tájékoztató példa szerinti GRA-M-l-et, GRA-M-3-at és GRA-M-4-et sorozatban hígítunk 0,15 mólos foszfátpufferral (amely 0,85% nátrium-kloridot tartalmaz és pH értéke 7,6), hogy mintákat készítsünk. A National Institute of Genetic 30 Research-től kapott anti-H-2-szérumot és a fenti mintát összekeverjük és 4 °C-on 2 órán át inkubáljuk. A célsejtek így kapcsolatba kerülnek az anti- H-2-szérummal. Lép- vagy nyirokcsomó sejteket, melyeket célsejteknek használunk, B10 (H-2b) és B10.BR (H-2k) egerekből a szokásos módon nyerhetünk. A sejtek PBS-sel történő mosása után nyúlkomplementet adunk a sejtekhez és 37 °C-on 1 órán át inkubáljuk a sejteket, majd megfestjük 0,2%-os tripan-kék PBS-sel, hogy meghatározzuk a %-os sejttoxicitást. Az anti-H-2 szérumot maximális hígításban használjuk úgy, hogy az végül 95% sejttoxicitást mutat GRA távollétében. A rendszerek GRA gátló hatásának meghatározását a 14. táblázat mutatja be. 14. táblázat GRA Anti-H-2 szérum, koncent-Célsejtek ráció GRA-M-1 D-23 (anti-H2Kk), X80 vagy B10BR (H—2k) lépsejtek D-32 (anti-H-20k), X300 GRA-M-3 D-33 (anti-H-2Kb), X600 B10 (H-2b) vagy lépsejtek D-2 (anti-H-2Db), X80 GRA-M-4 D-23 X80 vagy B10.Br (H—2k) nyirokcsomósejtek D-32 X300 A kapott eredményeket a 15. táblázat mutatja. Killer sejt E/T arány 40 : 1 20 : 1 10 : I 15 20 A sejttoxicitás %-a 15. táblázat Anti- A minták hígítása GRA H-2-------------------------------------------------------------------■— '___ Y"> Y4 Y8 Y1 A Y"n Y A4 Y1' szérum X2 X4 X8 X16 X32 X64 X128 X256 X512 0 * _ _ 13 14 12 13 14 13 14 13 14 13 I D-23 — 97 99 96 97 97 96 97 96 96 14 D-32-95 95 95 95 94 95 95 96 95 13 II —-19 15 14 12 15 12 11 12 13 14 D-33-98 98 99 99 98 99 99 99 99 15 D-2 — 95 96 95 95 97 95 97 95 95 17 III D-23 100 100 100 100 — —-100 10 D-32 99 99 99 99-——-99 10 Megjegyzések: GRA I: GRA-M-1 GRA II: GRA-M-3 GRA III : GRA-M-4 A feltüntetett sejttoxicitás akkor, ha csak komplementet használunk. A 15. táblázat eredményeiből azt láthatjuk, hogy 55 GRA-M-1, a GRA-M-3 és a GRA-M-4 esetében a H-2 hiánya megfigyelhető. 9. Teszt példa 60 C57BL/6 egérbe transzplantálunk Lewis tüdőrákot (LLC) (2x10®) azonos törzsből és hat nap múlva 1 ng (fehérje - a 2—(d) tájékoztató példa szerinti - GRA-M-3-at adunk bőr alá. Ezek után 65 a kezelést megismételjük 4 napon keresztül, egyszer naponta, azonos adaggal. Az utolsó kezelést követő napon a tumort kimetsszük és megmérjük. Kontrollként fiziológiás sóoldattal kezelt állatokat használunk. Minden tesztcsoport 5 állatból áll. Az eredmények : az átlagos tumorsúly a kontrollcsoportban 500 mg körüli. A GRA-M-3-mal kezelt csoportban 3 esetben a tumor eltűnését észleljük, és két alkalommal a tumorok súlyának átlaga 100 mg volt. 11
