190784. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szteroid-vegyületek mikrobiológiai átalakításának intenzifikálására
1 190 784 2 7,5 mg/cm3, B lombik: 8,5 mg/cm3, C lombik: 7,8 mg/cm3, D lombik: 15,1 mg/cm3. A fenti példa mutatja, hogy ciklodextrin jelenlétében végzett biokonverzió esetén a kiindulási szteroid koncentrációja kétszeresére növelhető a ho- 5 zam számottevő csökkenése nélkül. 10. példa Lanatozid-A átalakítása digoxinná 10 Streptomyces purpurascens (MNG 178) mikroorganizmus Czapek-Dox ferde agar-táptalajon nőtt tenyészetét steril vízzel lemossuk és az így kapott spóraszuszpenzióval beoltunk 100 ml alábbi 15 összetételű, és a beoltás előtt 121 °C hőmérsékleten 45 percig sterilezett, majd lehűtött tápközeget: 1 súly% szójaliszt 2 súly% glükóz pH (nátrium-hidroxid-oldattal beállítva): 7,8 20 Az így beoltott tenyészetet 32 °C hőmérsékleten, 230 percenkénti löketszámú rázóasztalon, 500 mles rázólombikban 3 napig inkubáljuk. Az így kapott oltótenyészet 5-5 ml-jével két párhuzamos kísérletben (A és B) 100-100 ml alábbi 25 összetételű, 121 °C hőmérsékleten 60 percig sterilezett tápközeget oltunk be: 2 súly% szójaliszt 1 súly% kukoricakeményítő pH (nátjium-hidroxid-oldattal beállítva): 7,0 30 A két („A” és „B” jelű) lombikban levő tenyészetet 32 °C hőmérsékleten, 230 percenkénti löketszámú rázóasztalon 2 napig inkubáljuk, majd mindkét lombik tartalmához 100-100 mg lanatozid-A 1 ml dimetil-szulfoxiddal készített és sterilre szűrt olda- 35 tát adjuk. Ezután az „A” jelű lombik tartalmához 200 mg béta-ciklodextrin 5 ml vízzel készített és 121 °C hőmérsékleten 10 percig sterilezett oldatát adjuk, a „B” jelű lombik tartalmához pedig csupán 5 ml steril vizet adunk. Mindkét lombik tartalmá- 40 nak inkubálását változatlan körülmények között további 3 napig folytatjuk. Az igy kapott ferment leveket 10-10 ml kloroformmal extraháljuk és kvantitatív vékonyrétegkromatográfiás meghatározással vizsgáljuk a kló- 45 roformos kivonatban jelenlevő termékeket. Az alábbi eredményeket kaptuk a leírt kísérletben : Lanatozid-A maradék „A” lombik „B” lombik 5 mg dezacetil-lanatozid-A 5 mg digoxin 50 mg 50 mg digitoxin 30 mg 20 mg acetil-digitoxin 1 mg 10 mg Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás androsztán-, pregnán-, kolesztán- illetőleg sztigmasztán-vázas vagy kardenolid típusú szteroidok mikrobiológiai átalakításának intenzifikálására, azzal jellemezve, hogy a szteroid mikrobiológiai reakcióját az átalakítandó szteroidra számítva 1- 10-szeres tömegű alfa-, béta- vagy gammaciklodextrin jelenlétében folytatjuk le és kívánt esetben az átalakulás végbemenetele és a reakciótermék elkülönítése után a ciklodextrint a rendszerből visszanyerjük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve. hogy a ciklodextrint a mikrobiológiai reakció előtt, vagy annak kezdetekor vagy előrehaladása során adagoljuk a rendszerhez. 3. Az 1. vagy 2. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a megfelelő ciklodextrint a szubsztrát beadagolása előtt adagoljuk a biokonverziós közegbe. 4. Az 1. vagy 2. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a szubsztrát-ciklodextrin zárványkomplexét adagoljuk a mikrobiológiai átalakításhoz. 5. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a szubsztrát ciklodextrinnal képzett zárványkomplexének oldatát vagy szuszpenzióját adagoljuk. 6. Az 1. vagy 2. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a ciklodextrint a mikrobiológiai konverzió 35-50%-ának végbemenetele után adagoljuk a rendszerbe. 7. Az 1. vagy 2. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a ciklodextrint, illetve a szteroidszubsztráttal képzett zárványkomplexét, esetleg ezek oldatát a biokonverziós közegbe történő beadagolás előtt sterilezzük. 8. Az 1. vagy 2. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a biokonverziós közegbe adagolt ciklodextrint a közeggel együtt sterilezzük. 9. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja a ciklodextrin visszanyerésére, azzal jellemezve, hogy a vizes biokonverziós közegből, a termékként kapott szteroid szerves oldószerrel történő extrahálása után a ciklodextrint valamely a ciklodextrin oldékonyságát erősen csökkentő oldószer, célszerűen hexán hozzákeverésével kicsapjuk, majd szűréssel elkülönítjük és kívánt esetben megszárítjuk. Rajz nélkül 7
