190687. lajstromszámú szabadalom • Eljárás poliszacharid alapú új antitrombotikus, valamint ezt hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmény előállítására
6 190687-tartalma 2,7%, ioncsoport-larlalma 3,70 meq/g, szulfamido-csoport-tartalma 0,73 mmól/g, idóz/glükóz arány 1,9. A termék a 2. ábrán látható NMR spektrumot adta (4% DaO-ban 50 °C-on, 270 MHz). III. példa Marha bélnyálkát (10 m5) pankreatinnal kezeltünk (40 aC, ph = 8,5, 20 óra). Az elegyet szűrtük, és a szűrletet az I. példában leírt módon dolgoztuk fel. 335 g fehér, amorf port kaptunk. Gálák tóz-amin-tar talma 0,28 inól/g, glukóz-amin-tartalma 0,90 mmól/g, átlag mólsúlya 5 600 dalion, másodlagos csúcs 41 000 dalton átlagnál (a meghatározás dexlránra vonatkoztatva történt), (ar)^J = +36,9°, kén-tartalma 6,1%, nitrogén-tartalma 2,8, ionos csoport-tartalmB 4,0 meq/g, szulfamido -csoport-tartalma 0,75 mmól/g, idóz/glükóz arány 1,8. IV. példa A III. példa szerint előállított terméket (100 g) chondroitináz ABC enzimmel kezeltük. Metanolos kicsapás (50-75 térfogat%) után a visszamaradó terméket elkülőnitettük. 72 g terméket kaptunk (fehér, amorf por), galaktóz-amin-tartalma 0,05 mmól/g, glukóz-amin-tartalma 1,20 mmól/g, átlagos mólsúlya 5 400 dalton, másodlagos csúcs 40 000 dalton átlagnál (a meghatározás dextránra vonatkoztatva történt), («:)$> = 61,2°, kén-tartalma 6,2%, nitrogén-tartalma 2,75%, ionos csoport-tartalma 4,1 meq/g, szulfamido-csoport tartalma 0,91 mmól/g, idóz/glükóz arány 1,9. Az alvadásgátló aktivitást az USP módszer szerint határoztuk meg. Az antitrombin és az anli-Xii aktivitást chrotnogén szubszlrálum módszerrel határoztuk meg, amikoris tisztitolt tehén—antitrombin tll-l, illetve S-2238 és S-2222 szubsztrálumokal (Rabi AB, Svédország) alkalmaztunk. Antitrombotikus aktivitás Az antitrombotikus aktivitási patkányon, Umet8u modell (Thrombos. Haemoslas. 39, 74- -83, 1978) alapján határoztuk meg. Eszerint az nrteriovenosus fistulában vérrögöket idéztünk elő oly módon, hogy a vért 15 pei— cen át selyemszál mentén folyattuk. Mértük a placebo hatást és a vizsgálandó anyag hatásét különböző dózisoknál a vérrögképződésre. A dózis és a vérrög-képzódés gátlása közötti összefüggésből, a placebo hatására vonatkoztatva származtatható az IDso (a vérrög-képződés 50%-os gátlásához szükséges dózis). Eredmények: Termék heparin USP I. példa II. példa III. példa IV, példa Haemorrhagiás aktivitás a) Hajszálér-vérzéses kísérlet patkányon 10 15 20 25 30 35 40 IDso (mg/kg) 0.5 6.5 5.0 4.0 5.3 Farmakológiai kísérletek*. Az I-IV. példa szerint előállított termékeket számos farmakológiai kísérletben vizs- 45 gáltuk. Összehasonlító anyagként heparin USP-t alkalmazunk. A véralvadásra gyakorolt hatás 50 Alvadás-Anti-Anti-Xa Termék gátló trombin aktivitás aktivitás aktivitás 55 (IU/mg) (IU/mg) (IU/mg) heparin 179 164 167 I. példa l 0.5 4.5 II. példa 1 0.1 5 60 III. példa 3 1.0 G IV. példa 4 1.3 8 65 A piacéból vagy a vizsgálandó anyagot altatott patkányok hímvesszőjének hátulsó (dorsalis) vénáján keresztül adagoltuk. 1 perc, múlva két, előzőleg ejtett bevágás mentén kézzel egy bőrcsíkoL Léptünk le az állat loboroLvált hasáré)!. A sebet gézzel bekötöztük, és a bőrdarabkát a gézre ráfektettük. 10 perc múlva a gézt eltávolítottuk, és a benne lévő vért 20 ml vízzel extraháltuk. A víz haemoglobin-tartalmát spektrofotometriásán mértük, és a vérveszteséghez paraméterként alkalmaztuk [Lásd Thrombos. HaeinosLns. 42: 466 (1979)1. E kísérlet során a 11. példa szerinti terméket és a heparinl hasonlítottuk össze különböző dózisokban, megfigyelve az élj termék és a heparin antitrombotikus aktivitása közti különbséget. Az eredményt a 3. ábra mulatja. Hasonló eredményeket kaptunk az [., ITT. és IV. példa szerinti termékkel is. b) Izom-vérzéses kísérlet patkányon 5
