190506. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új diklór-16alfa -metil -pregnán származékok előállítására
1 190 50í 2 extraháljuk, az extraktumot 0,1 n hidrogén-klorid-oldattal mossuk, szárítjuk és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. Szilikagélen végzett kromatografálás után (eluens: kloroform és etil-acetát 92 : 8 arányú elegye) tiszta etanolbó) átkristályosítva 1,054 g kívánt terméket kapunk, olvadáspontja 150°C. Elemaualíziseredmények a C30H40Cl2O5 összegképlet alapján: számított: C% = 65,33, H% = 7,31, Cl% = 12,86 talált : C% = 65,0, H% = 7,3, Cl% = 10,0. 5. példa Gyógyszerkészítmény előállítása Aeroszol készítmény, amely dózisonként az alábbi összetevőket tartalmazza: 1. példa szerinti hatóanyag 0,5 mg emulgeálószer 0,15 mg hajtóanyag 50 mg A találmány szerinti eljárással előállított (I) általános képletű vegyületek farmakológiái tulajdonságait az alábbiakban ismertetjük. A következő kísérletekben X vegyidet a 2 342 738 számú francia szabadalmi leírás I. példája szerint előállított 9a, 11 j3-diklór-l6a-metil-21 -acetoxi-pregna-1,4-dién-3,20-diont, Y a 2 381 065 számú francia szabadalmi leírás 5. példája szerint előállított 9a,-1 lj3-dik!ór-16a-metil-21-pentanoiloxi-pregna-l,4- •dién-3,20-diont, Z vegyület pedig a 2 464 443. számú francia szabadalmi leírásból ismert 9a., 11/3- -diklór-16a-metil-21-diciklohexil-metoxi-karboníl-oxi-pregna-1,4-dién-3,20-diont jelenti. A) Gyulladásgátló hatás vizsgálata helyi alkalmazás esetén 100-110 g súlyú nőstény Wistar patkányok mellkasán a bőr alá két darab, vizsgálandó vegyületet tartalmazó vattacsomót ültetünk be. A vattacsomót az alábbiak szerint készítjük el: a vizsgálandó vegyületet 20 pl etanolban oldjuk, az oldatot a vattacsomóra visszük, 24 órán át 40°C-on szárítjuk, majd beültetjük. A hatást mg/csomóban fejezzük ki. Az állatokat a kísérlet harmadik napján leöljük, a surjadzó szövettel körülvett vattacsomót frissen lentérjük, majd legalább 18 órán át 60°C-on inkubáljuk, és újra lemérjük. A vattacsomó eredeti súlyának ismeretében kiszámítjuk a sarjadzás súlyát. A csecsemőmirigyeket szintén eltávolítjuk, és súlyuk meghatározásával kiszámítjuk a vizsgált vegyületek szisztémikus thymus-pusztító hatását. A vizsgált anyagok az 1., 2. és 3. példák szerint előállított vegyületek, az ismert X, Y és Z vegyüld, valamint a dexametazon voltak. Az eredményeket ED* 0/csomó értékben fejezzük ki, amely alatt azt a dózist értjük, ami 50%-os sarjadzásgátlást, illetve 50%-os thymus-visszafejlődést okoz. A kísérleti eredményeket az 1. táblázatban adjuk meg. 1. táblázat Vegyület Saijadzás-Thymusgátlás-pusztulás 1. példa szerinti 0,0004 mg hatástalan vegyület 1 mg-ban 2. példa szerinti vegyület 0,0005 mg >1 3. példa szerinti vegyület 0,0002 mg X 0,0120 mg 0,360 mg Y >0,1 mg >0,1 mg Z 0,0008 mg hatástalan Dexametazon 0,4 mg 0,8 mg-ban 0,015 mg A vattacsomó-beültetéses kísérlet eredményeiből látható, hogy a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek helyi hatása nagyobb az ismert X, Y, Z és dexametazon hatásánál, továbbá a 3. példa szerint előállított vegyület 4-szer hatásosabb, mint a szerkezetileg leginkább hasonló diciklohexil-származék (azaz Z vegyület). Az 1. példa szerint előállított vegyület szisztémikus hatása ugyanakkor kisebb, mint az ismert vegyületeké, különösen a dexametazoné. B) Gyulladásgátló hatás vizsgálata orális alkalmazás esetén A vizsgálatot a szokásos sarjadzási teszttel Meier R, és munkatársai [Experientla 6, 459 (1950)] módosított módszerével végezzük. 100-110 g súlyú nőstény Wistar patkányok mellkasának bőre alá két darab, egyenként 10 mg súlyú vattacsomót ültetünk be. A beültetés után azonnal elkezdjük a vizsgált vegyületekkel az orális kezelést. Két napon át, naponta két alkalommal kezeljük az állatokat. Az utolsó kezelés után 16 órával — a kísérlet harmadik napján — az állatokat leöljük. A s:.rjadzó szövettel körülvett vattacsomót frissen lemérjük, majd 18 órán át 60°C-on tartjuk, és újra lemérjük. A sarjadzás súlyát az eredeti súly figyelembevételével számítjuk ki. A vattacsornó kivételével egyidőben eltávolítjuk a thymusokat is, ezeknek súlyából megbecsülhetjük a vegyületek thymus-pusztító aktivitását. Az eredményeket ED50 értékben fejezzük ki, ami alatt azt a dózist értjük, mg/kg-ban megadva, ami 50%-os sarjadzásgátlást illetve 50%-os thymus-visszafejlődést idéz elő. Az eredményeket a 2. táblázat szemlélteti. 2. táblázat Vegyület Sarjadzás-Thymusgátlás-pusztulás 2. példa szerinti hatástalan hatástalan vegyület 50 mg/kg-50 mg/kgban ban X 100 mg/kg 50 mg/kg Y 50 mg/kg 15 mg/kg Z 80 mg/kg 80 mg/kg Dexametazon. 0,05 mg/kg 0,035 mg/kg A táblázat eredményeiből látható, hogy a 2. példa szerint előállított vegyület hatása orális alkalmazás esetén igen csekély, különösen a dexametazon hatásához viszonyítva. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 4
