190420. lajstromszámú szabadalom • Eljárás aminoglikozid-antibiotikumok elkülönítésére erjesztéses oldatokból
1 190 420, 2 erjesztéses oldathoz 240 ml ammónium-formájú Wofatit CP-300 ioncserélő gyantát adunk. A gyantát tartalmazó erjesztéses oldatot 4 órán át kevertetjük, majd 3 liter vízzel hígítjuk. Ezután a kationcserélö gyantát az erjesztéses oldatból dekantálással és szűréssel eltávolítjuk, majd vízzel micélium-mentesre mossuk. Az ioncserélő gyantát kromatografáló oszlopba töltjük, majd 1 n ammónium-hídroxid oldattal 200 ml/óra sebességgel eluáljuk. Az eluálás során 20 ml-es frakciókat szedünk, amelyekben a tobramicint vékonyrétegkromatográfiás vizsgálattal mutatjuk ki, abszorbensként szilikagélt, futtatórendszerként metil-etilketon : etanol : 25%-os ammónium-hidroxid (1 : 1 : 1) elegyét, előhívó reagensként 0,5%-os acetonos ninhidrin-oldatot alkalmazva. A tobramicint tartalmazó frakciókat egyesítjük, majd az oldat pH-ját hűtés közben 10 n kénsav-oldattal pH = 7-re állítjuk be. A semlegesített oldathoz 300 mg aktívszenet adunk, és az oldatot 15 percig kevertetjük, majd leszűrjük. A szűrletet 150 ml ammónium-formájú Amberlite CG-50-I gyantát tartalmazó oszlopon (oszlopátmérő 2,5 cm, gyantarétegmagasság 34 cm) folyatjuk át, majd a gyantaágyat 1,5 liter ionmentes vízzel mossuk. Ezután a gyantaoszlop eluálását sorrendben 2-2 liter 0,1 n, 0,15 n, 0,2 n ammónium-hidroxid oldatokkal végezzük, 200 ml/óra sebességgel. Az eluálás során 50 ml-es frakciókat szedünk, amelyeket vékonyrétegkromatográfiás módszerrel vizsgálunk, a fenti abszorbenst és futtatórendszert alkalmazva. A tobramicint tartalmazó frakciókat egyesítjük és vákuumban 50-60 °C-on bepároljuk. A bepárlási maradékot vákuumban foszforpentoxid felett súlyállandóságig szárítjuk. így 4,62 g tobramicin bázist kapunk. [u]„= - 128° (c= 1, víz) Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás nagytisztaságú aminoglikozid-antibiotikumok vagy antibiotikum-komplexek és farmakológiailag elfogadható sóik elkülönítésére erjesztéses oldatokból az adott esetben jelenlévő kétértékű kationok vízben oldhatatlan só formájában való leválasztásával, az antibiotikumoknak vagy antibiotikum-komplexeknek kationcserélő gyantán történő megkötésével és azt követő elúcióval, majd az így kapott nyerstermék-eluátum kromatográfiás 50 tisztításával, és kívánt esetben ezt követő sóképzéssel, azzal jellemezve, hogy az erjesztéses oldatban lévő kétértékű kationok leválasztása után a kapott ■csapadékot és a mikroorganizmus sejtjeit lartaima- 5 zó erjesztéses oldatot közvetlenül ammóniumformájú karboxil-lípusú ioncserélő gyantával kölcsönhatásba hozva az antibiotikumot vagy antibiotikum-komplexet pH = 4-8 értéken, előnyösen pH = 7-en megkötjük, majd az antibiotikumot vagy 10 antibiotikum-komplexet tartalmazó ioncserélő gyantát és a mikroorganizmus sejtjeit egymástól alkalmas módon elkülönítjük, ezután az. antibiotikumot vagy antibiotikum-komplexet ismert módon az ioncserélő gyantáról leoldjuk és megtiszlít- 15 juk, és kívánt esetben az antibiotikum vagy antibiotikum-komplex gyógyászatban felhasználható sóját ismert módon előállítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganalosítási módja, azzal jellemezve, hogy az erjesztéses oldal-20 ban lévő kétértékű kationok kicsapását pH = 3-on oxálsavval végezzük. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás foganalosítási módja, azzal jellemezve, hogy az erjesztéses oldalból az antibiotikumot vagy antibiotikum 25 komplexei a fenti oldatba bekevert ammóniumformájú karboxil-típusú kationcserélő gyantával kötjük meg. 4. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás foganatositási módja, azzal jellemezve, hogy az anlibioti-30 kuni vagy antibiotikum-komplex megkötése céljából az erjesztéses oldatot ammónium-formájú karboxil-típusú kationcserélő gyantával töltött, lebegőágyas oszlopon áramoltatjuk át. 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljá- 35 rás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az antibiotikum vagy antibiotikum-komplex megkötését ammónium-formájú Amberlite IRC 50 kalioncserélő gyantával végezzük. 6. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljá- 40 rás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az antibiotikum vagy antibiotikum-komplex megkötését ammónium-formájú Wofatit CP-300 kationcserélö gyantával végezzük. 7. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljá- 45 rás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az antibiotikumot vagy antibiotikum-komplexet tartalmazó ioncserélő gyantát az erjesztéses oldalból hígí'ás után dekantálással és/vagy szűréssel különítjük el. Rajz nélkül 5
