190406. lajstromszámú szabadalom • Eljárás D-tejsav előállítására lactobacillus bulgaricus DSM 2129 alkalmazásával
1 190 406 2 vaftlöállitott termék viszont 1,5-2% L-tejsavat tartalmaz, amely a közeg egyik alkotórészéből, a kukoricalekvárból származik. A szűrés után az L-tejsav elhasitása oly módon történik, hogy a szűrletet átbocsátjuk egy enzimreaktoron, amely specifikusan az L-tejsav molekulát hasító enzimet tartalmaz. Megfelelőek erre a célra pl. az L-iaktátoxidáz, L-laktátdehidrogenáz, vagy acitokróm-b2. Az L-Iaktátdehidrogenáz ko-faktorként NAD-t igényel, amely éppenúgy hordozóhoz 1 kötött lehet, mint maga az enzim, és igy regenerálható és újra felhasználható. A citokróm-b2 esetében hexaciano-ferri-ferrát szerepelhet ko-fakiorként, ezt nemesfém-elektróda segítségével anódosan lehet oxidálni; ily módon a rendszer regenerálható. 15 3. példa A második példában leírt eljárással állítjuk elő a 2o lörzstenyészetét és beoltáshoz szolgáló tenyészetrészletet, de tápközegként a következő „Medium 5” jelű, erjesztendő szubsztrátként tejcukrot tartalmazó oldatot alkalmazzuk; (adatok g 1-ben): Porított tejsavó 60 Kálcium-karbonát 70 Élesztőkivonat 3 Szőj a liszt 5 Nátrium-acetát 5 Nemionos felületaktív anyag 1 ml/1 Amint a 2. példában, úgy ez esetben is a tenyészet beindulása után cukrot adagoltunk be mindaddig, amíg az összes hozzáadott tejcukor mennyisége 130 g/1 nem lett. A tejsavképzés valamivel tovább tart, mint a 2. példában, mintegy 45-55 óra múlva 35 azonban befejeződik. Egyebekben az eljárás pontosan követi a 2. példában leírtakat. A törzstenyészeiet és az oltóanyagot nitrogénatmoszférában állítjuk elő. A 3., 4. vagy 5. jelzésű közegei alkalmazzuk, azzal a különbséggel, hogy a kiindulási összetételből minden esetben hiányzik a kálcium-karbonát. Ezt száraz állapotban vagy 45 20%-os szuszpenzióban később adagoljuk a tápközeghez, úgy, hogy annak pH értéke ne süllyedjen 5.5 alá. 48 óra múlva kezdődik a tápoldat utánadagolása. A hígítási sebesség kezdetben 0,01 1/h a tápoldat 1 literére számítva, s úgy történik, hogy gQ folyamatosan mindig ugyanakkora folyadékmenynyiséget veszünk le a fermentorból, mint amekkorát hozzáadunk. A hígítási sebességet lassan emeljük, amíg egy 0,03-0,04 l/h/1 iiter tápközeg ütemet el nem érünk, miközben a fermentorból távozó gg folyadékban a D-tejsav tartalom 5-7% lesz. Egy folyamatos szeparátor segítségével a fermentor kifolyónyilásáná! a sejltömeget elválasztjuk és 90%ál visszavezetjük. A felüiúszót kálcium-hidroxiddal 6.5 pH-ra állítjuk be, majd eredeti térfogatának mintegy 1,10-ére bepároljuk. Egy hűtőtornyon keresztülvezetve e sűrítményt +4 'C-ra hütjük le, miközben a kalcium-laktál kikristályosodik. A betöményitett oldat folyamatosan áramlik be a hűtőtoronyba, mig a kivált kálcium-laktátot szabályos távközönként egy kitolható lemezzel eltávolítjuk. Az anyalúgol a fermentorba visszavezetjük. A lejsavat kénsavval szabaddá tesszük a kinyert kálcium-lakiátból s utána szűréssel elválasztjuk a kivált gipsztől. 5. példa A 4. példa szerinti folyamatos tejsav-elöállításl azzal az eltéréssel ismételtük meg, hogy a pH szabályozására nem kálcium-karbonátot, hanem nálrium-hidroxidot alkalmaztunk. Ennek az eljárásnak az az előnye, hogy így a pH-t 6,5 és 6,8 között tartottuk, miáltal a Lactobacillus bulgaricus DSM 2129 fermentációs sebessége megnövekedett. Az így előállított nátrium-laktát oldatot ioncserélő oszlopokon bocsátjuk át, amelyek a tejsavat megkötik. Mihelyt egy oszlop tejsavval telítetté válik, megkezdjük a tejsavat sósavval eluálni. Híg nátronlúggal való regenerálás után az oszlopot újólag felhasználhatjuk a tejsav megkötésére. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás D-tejsav előállítására glükózt és/vagy tejcukrot, valamint más, szokásos adalékanyagokat tartalmazó tápközeg anaerob fermentációja révén, azzal jellemezve, hogy tejsavtermelő mikroorganizmusként Lactobacillus bulgaricus DSM 2129-t alkalmazunk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy tápközegként tejsavót vagy porított lejsavóból készült szuszpenziót alkalmazunk. 3. A 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a tápközeghez glükózt adunk. 4. Az 1-3. igénypontok szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a fermentációt + 30 °C és + 50 CC közötti hőmérsékleten végezzük. 5. Az 1-4. igénypontok szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a fermentációt +40PC és +45,,C közötti hőmérsékleten végezzük. 6. Az 1-5. igénypontok szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a fermentációt 4,5 és 7,0 közötti pH értéken végezzük. 7. Az 1-6. igénypontok szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a fermentációt 6,5-6,8 pH értéken végezzük. 8. Az 1-7. igénypontok szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a tápközeghez kálciumkarbonátot adunk. ■9. Az 1-7. igénypontok szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a műveleteket védőgázatmoszférában végezzük. Rajz nélkül Kiadja az Országos Találmányi Hivatal A kiadásért felel: Himer Zoltán osztályvezető Szedte a Nyomdaipari Fcnyszedö Üzem (878142.09) 88-0780 — Dabasi Nyomda, Budapest — Dubus felelős vezető: Bálint Csaba igazgató 4
