190169. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új 4-hidroxi-2H-1,2- benzotiazin- 3-karboxamid- 1,1,-dioxidok előállítására
1 mi69 2 A vegyület tetrametil-ammóniumsója = D vegyület B vegyület A vegyület etanol-ammóniumsója = E vegyület A vegyület hemikálciumsója = F vegyület A vegyület ammóniumsója = G vegyület Körülbelül 450 g testsúlyú, ébren lévő patkányoknak garatszondával beadtuk a vegyületek vizes oldatát, az A vegyületet tylose-szuszpenzióként. 1 óra múlva, előzetes Nembutal narkózis után vért vettünk az állatok hasi aortájából (aorta abdominalis). A centrifugálással kapott vérlemezkékben gazdag plazmát összegyűjtöttük. Csoportonként 3 állat szolgált kontrollként, amelyek nem kaptak a vegyületből. A vérnyerés és plazmakészítés módja mindkét csoportnál azonos volt. Antikoagulánsként 2 %-os nátrium-citrát oldat szolgált 1 +9 térfogatarányban. A vizsgálatokat egységesen 1 órával a vegyületek beadása után végeztük el. A kapott eredményeket a következő táblázat mutatja : 2. táblázat Dózis mg/kg p. o. A C D Vegyület B E F G 0,5 86% 100%-0,25 93% 100%-0,125 14% 100%-0,05-96% 97% 100% 87% 77% 92% 0,02596-32% 20% 86% 53% 64% 36% 0,0125-0% 27% 26% 10% 27% 7% Számadatok: százalékos összetapadás gátlás (mért paraméter: optikai sűrűség). Mindegyik vizsgált vegyület szájon át történő adás után a patkányokon összetapadás gátlónak bizonyult. Mindegyik só jelentékenyen hatásosabb volt, mint maga az A vegyület. A sók alkalmazásánál, az azonos összetapadás gátlás elérésére elegendő volt az A vegyület dózisának körülbelül ötödehatoda. c) A vérzési idő meghatározása egéren Módszer: A vérzési időt nem narkotizált, 20-25 g testsúlyú nőstény egereken határoztuk meg DUKE módszerével (J. Amer. Med. Assoc. 15, 1187, 1910). Az állatok farkának végéből mintegy fél millimétert levágtunk, és a kiáramló vért 30 másodpercenként óvatosan a szűrőpapírcsíkkal felitattuk. Az így kapott vérfoltok száma megadja a vérzési időt. A normális vérzési idő egérnél átlagban 4,1 perc. Állattörzs: NMRI Biberach Takarmány: Altromin R Az állatok száma kísérletenként: 5 A vizsgálandó vegyületet garatszondával adtuk be, a farokhegy levágása előtt 1 órával. Az eredményeket a következő táblázat foglalja össze : 3. táblázat Dózis mg/kg A vérzési idő Vegyület meghosszabbodása A 10 + 103% Y 10 + 30% Z 10 + 62% Mint látható, az A vegyület már 10 mg/kg dózisban a vérzési idő 100 %-os megnövekedését okozza. Ebben a dózisban az X és az Y összehasonlító vegyületeknek már kimutatható mellékhatásaik vannak anélkül, hogy a vérzési idő 100 %-os megnövekedését elérnék, d) Az akut toxieitás meghatározása Az akut toxieitást a vizsgálandó vegyületeknek szájon át való adása után határoztuk meg hím- és nőstény egereken. A vegyületeket tylose-szuszpenzióban adtuk be. A következő táblázat a megadott dózisú vegyület beadása után 1, 7 és 14 napon belül elpusztult állatok számát mutatja : 4. táblázat Elpusztult állatok Vegyü- Dózis Állatok száma let mg/kg száma megfigyelési idő 1 nap 7 nap 14 nap A 250 10 0 0 0 1000 10 0 0 0 B 250 5 0 0 0 1000 5 0 1 1 Y 250 5 0 3 3 Z 250 5 I 4 4 Az Y és Z vegyületek erős gyulladáscsökkentő hatásúak, patkányokon már 1-5 mg/kg p. o. dózisban (oedema-teszt), és ugyanakkor patkányokon erős gyomorfekélyt kiváltó hatásuk van. Ezzel szemben az A vegyületnek nincs gyulladásgátló hatása az oedema-tesztben (E35 > 200 mg/kg) és 100 mg/kg dózisig nincs fekélyt kiváltó hatása sem. Az, hogy az A vegyületnek ilyen mellékhatása nincs, megmagyarázza a rendkívül kicsi akut toxieitást (» 1000 mg/kg). Az összehasonlító vegyületek LD50 értékei ezzel szemben 250 mg/kg alatt vannak. A találmányt a következő példák ismertetik : 1. példa N-(6-Klör-pirazin-2~il)-4-hidroxi-2-metil-2H-l ,2- benzotiazin-3-karboxamid-1,1 -dioxid 9,0 g (33 mmól) 4-hidroxi-2-metil-2H-1,2-benzotiazin-3-(metoxi-karbonil)-l,l-dioxidot és 4,36 g (33 mmól) 2-amino-6-klór pirazint nitrogén védőgáz alatt, 1200 ml xilolban 24 óra hosszat, visszafolyató hűtő alatt forralunk. A reakció közben keletkező metanolt 4-Á-molekulaszűrővel távolítjuk el, amit Soxhlet-feltétben helyezünk el. Lehűlés után egy éjjelen át állni hagyjuk és másnap a kivált kristályokat kiszűrjük, amiket végül dioxánból át5 10 15 20 25 ;:0 35 40 45 5C 55 60 4
