190134. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mutagén anyagok jelenlétének és mennyiségének a meghatározására
8 190134 9 a minta elnyelését 405 nm-en mérjük az előre programozott idő-osztó rendszer szerint. Az elnyelési értékekből az időfüggvényében növekedési görbét készítünk, melyből a minta mutagén hatását és számos egyéb paramétert származtathatunk. A baktérium mutagenitás turbidometriás vizsgálata az összes olyan típusú iiiulagenitási vizsgálatra használható, ahol azt kell vizsgálni, hogy a szóban forgó minta képes-e mutációi okozó módon reagálni a DNS-sel. 1. táblázat Az FP-901 lurbiditás-megkülönbözteló ereje Ai5n»n - 9 Sűrű- A«os± ség 10® S.D. S.D./ /A405 <%) AW10« sejt 5 0.000 0.000 ___ —— 20 0.021 0.004 19 0.001 40 0.046 0.007 15 0.001 60 0.062 0.006 10 0.001 80 0.076 0.002 2.6 0.001 160 0.159 0.010 6.0 0.001 240 0.239 0.010 4.2 0.001 320 0.326 0.015 4.6 0.001 400 0.405 0.018 4.4 0.001 480 0.486 0.020 4.1 0.001 560 0.562 0.022 3.9 0.001 640 0.638 0.015 2.4 0.001 720 0.706 0.015 2.1 0.001 800 0.772 0.014 1.8 0.001 880 0.833 0.012 1.4 0.001 960 0.890 0.009 1.0 0.001 1040 0.938 0.011 1.2 0.001 1120 0.990 0.010 1.0 0.001 S.D.: standard deviáció 2. táblázat A növekedési faktorok hatása az E. coli WP2 uvrA sűrűségére és auxotróf növekedési időre. A kezdet i populáció mérete 5 x 10* sejt. Trp-konc. sűrűség/mérő növekedési (pg/ml) küvetta idő 0.0 2.5 X 107 2h 20' 0.4 1.6 X 10* 5h 0.9 2.0 X 10* 5h 20’ 1.6 3.2 X 10* 6h 3.2 6.4 X 10« 7h 6.4-48 n.10* 8h 20’ Trp: triptofán n: sejtszám a küvettában A találmány szerinti eljárást az alábbi kiviteli példán mutatjuk be. F. IC 15 20 25 30 Példa Auramin mutagén vizsgálata Salmonella typhimurium TA 08 (hie*) baktériumokat Uofilízáltunk. Aroclor 1 254-gyei Indukált, 160-160 g súlyú him Wie tar-patkányok májéból Ames éa munkatársainak módszerével (Mutation Research, 31., 347-364., 1975) hofiUzélt S9 aktiváló rendszert készítettünk. A vizsgálathoz a fentiekben már említett Vogel-Bonner E tápközeget használtuk, amely 27. glükózt is tartalmazott. Ehhez a folyékony tápközeghez 1,5 /umol mennyiségű hisztidint adtunk. 400 juhter tápközeghez, ahol a kezdeti populáció mérete 5 x 10* sejt volt, különböző mennyiségű auramini adtunk. Az elegyet 24 órán át 37 *C-on inkubáltuk. A baktériumok növekedését időnként úgy ellenőriztük, hogy a közegben függőlegesen polikromatikus fényt (420-650 nm) bocsátottunk át és megmértük a közeg elnyelését. A növekedési görbe az alábbi túlélési fok értékeket szolgáltatta. Auramin koncentráció Túlélési fok (pg/ml) (%) 0 100 1 90 ± 8 10 74 ± 4 30 51 ± 3 100 2 ± 0 Azt is kiszámítottuk, hogy 1 Mg r 10* túlélőből 1,8 reverlánst indukált. 35 Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás mutagén Bnyagok jelenlétének és mennyiségének a meghatározására, azzal 40 jellemezve, hogy valamely sejt-populációt a vizsgált mutagén hatásának tesszük ki, amire a7. eredetileg egységes sejt-populáció szub-populációkra differenciálódik, a differenciálódott sejt-populációk sűrűségében beállott 45 változás által okozott turbiditás-beli változást egy adót t hullámhosszon optikai sűrűséget mérő berendezéssel az optikai sűrűségben beállt változásként mérjük, és a szub-populációkban levő sejtek mennyiségét 50 ezzel arányosan határozzuk meg. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a differenciálódott sejt-populációk növekedéséi függőlegesen mérő fotométerrel, fluorométerrel, nefelométerrel 55 vagy luminoinéterrel határozzuk meg. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a turbidilást mérő elnyelési értékekei valamely elóre-program^zotl idő-oszló rendszer szerint mérjük, és 60 a: értékekből az idő függvényében növekedosi görbét kapunk. 3 rajz A kiadásért felel a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó Igazgatója 6 88.75,66-4 Alföldi Nyomda Debrecen - Felelő« vezető: Bankó István vezérigazgató
