190070. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a gyökérrontó tapló ellen alkalmazható bioaktív készítmény előállítására fermentáció útján
4 190070 5 vágáslapjainak kezelése olyan módon, hogy a vágáslapra hulló bazidiospórák csírázni ne tudjanak, illetve ne tudjanak micéliumai a tuskóba, valamint a gyökerekbe hatolni. A tuskók felületének egyszeres kezelésével megoldható a vágáslapokon a Fomes annosus kiszorítása. Erre irányuló provokációs fertőzési kísérletek igazolták a 10%-os Novenda, az 5% bórsav és a borax por hatékonyságát. Ez a tuskókezelési módszer azonban nem oldja meg a problémát, mivel a tuskó gyökerei a talajba mosódott Fomes annosus bazidumspóráitól még fertőződhetnek. A kórokozó ellen ezért leghatékonyabb védekezési módszernek valamilyen antagonists szaprofiton gombafaj alkalmazása látszik. Az antagonists gomba ugyanis nemcsak a tuskó vágáslapján akadályozza meg a Fomes annosus megtelepedését, hanem áthálózza a tuskót, annak szijácsát, illetve behatol a gyökerekbe is. így a talajba mosódott Fomes annosus bezidumspórái már antagonists gombával áthálózott gyökerekkel találkoznak. Fertőzni tehát azt már nem tudják. Rishbeth (1952) vetette fel annak gondolatát, hogy a gyökérrontó tapló elleni védekezésben az óriás terülőgombát (Peniophora gigantea) lehetnek felhasználni mint antagonistát. Antagonists tulajdonsága mellett azért is előnyös ez a gomba, mert mesterséges táptalajon ivartalan termőképletet hoz létre, ami nem minden magasabb rendű gombafajnál fordul elő. A finn KEMIRA cég egyik tájékoztatója szerint folytak kísérletek laboratóriumban, Petri-csészében inkubált Peniophora gigantea spóra-szuszpenziójával. Az ilyen laboratóriumi eljárás csak kis területen elvégezhető kísérleti kezelések esetén alkalmas, emellett a spóraszám kevésnek tűnik, és a megeredés százalékáról a termékismertető nem ad tájékoztatást. Saját kísérleteink során azt találtuk, hogy a Petri-csészében kéthetes inkubáció során képződött ivartalan termőképletek lemosással készített szuszpenziója - megfelelő 5 spórasürüség mellett - alkalmas készítmény lehet a tuskókezelésre. Az előkisérletek azt mutatták, hogy a kívánt eredmény eléréséhez (közel 100%-os megeredés) szükséges spórasűrűség legalább 4xl04/ml. A vizsgálatok so- 10 rán az is igazolást nyert, hogy a Petri-csészékben előállított, azokról lemosott spórák szuszpenziójával üzemi védekezési módszert kidolgozni nem lehet. Meg kellett oldani a spóraszuszpenzió tömeges előállítását. 15 Azt találtuk, hogy ha szerves tápanyagokat, szervetlen sókat, nyomelemeket és adott esetben további adalékokat tartalmazó tápközegeket a Peniophora gigantea óriás terülőgomba spóráival beoltunk és a gombát 20 levegőztetés mellett süllyesztett tenyészetben mintegy 27 °C-on fermentáljuk, olyan spóraszuszpenziót kapunk, amely már lOxlO7 spórát tartalmaz milliliterenként, tehát a fatuskók kezelésére kiválóan alkalmazható. A meg- 25 felelően hűtött és tárolt szuszpenzió közvetlenül is felhasználható permetezés vagy ecsetelés útján, az erdőgazdaság extenziv jellege miatt azonban az is lehet célszerű, ha a szuszpenziót liofilizáljuk vagy másmilyen 50 módon porrá szárítjuk. A Peniophora gigantea gombát vad törzsként izoláltuk sarangolt tönkökről, illetve tűzifa választékból, esetenként nevelő vágásokról, a kéregre terülő termótest levá- 35 lasztásával. A kapott anyagot először petricsészén szélesztettük, után Roux-palackokban tovább szaporítottuk, végül folyékony tápközegben is próbáltuk fermentálni. Kritérium az elérhető spóraszám/ml volt. A legalkalma- 40 sabbnak bizonyuló három törzzsel az alábbi eredményeket kaptuk: Tenyésztés módja és időtartama ferde agaron Roux-palackban, 14 nap Erlenmeyer lombikban, sikrázógépen, folyékony tápközegben. 10 nap Üvegfermentorban, folyékony tápközegben, 9 nap törzs 15/2 Spóratartalom 1 ml-ben törzs 15/3 törzs 15/6 60 millió 85 millió 107 millió 145 millió 515 millió 435 millió 153 millió 540 millió 200 millió (A spórák számlálásának a folyékony tápközegben lévő kis fragmentumokat is beleszámítottuk, mert ezek később szintén kicsíráznak. A szilárd felületről lemosott szuszpenzióban fragmentumok nem voltak.) A ferde agaron történt elszaporitáshoz az alábbi összetételű táptalajt alkalmaztuk: 1.5% malata 0.85% konyhasó pH 5.0 2.0% agar-agar. A folyékony tápközeg összetétele: Ipari malata 40 g kristálycukor 10 g kukoricalekvár 1 g ammónium-tartarát 2 g pékélesztő kivonat 6.2 ml magnéziumszulfát 0.2 g cinkszulfát 0.1 g mangánszulfát 0.1 g rézszulfát 0.01 g bórsav 0.01 g csapvíz ad 1000 ml pH 5.0. 4
