190017. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pirimicin elkülönítésére és tisztítására
190017 hidrogénfoszfát és sterilezés előtt 0,6% pálmaolaj. A pH- érték sterilezés előtt 10—11, sterilezés után 7,6—7,8. A tenyésztést 28 °C-on végezzük; levegőztetés: 0—36 óra: 3 liter/perc; 36—168 óra: 6 liter/perc: keverés 800/perc. Habzásgátlóként pálmaolajat használunk. A fermentáció befejezésekor — 168 óra múlva — a fermentlé primicin-tartalma 4500—550 /ig/ml. A fermentlevet 3,0—3,5 pH-értékre állítva szűrjük. A hatóanyagot a micélium tartalmazza, mivel a primicin vízben gyakorlatilag oldhatatlan. A nedves micéliumot porlasztva szárítjuk; a szárítás után kapott nyers primicin hatóanyag-tartalma ~ 4%. A találmány szerinti eljárást szemléltetik a következő példák. 5 1. példa Nyers primicin-szulfát előállítása 2,2 liter metanolban keverés közben feloldunk 40 g (~ 2%) szilárd triklórecetsavat, majd hozzáadunk 1 kg száraz micéliumot (hatóanyag-tartalma 40 g/kg). Az extrahálást 40-45 °C-on keverés közben végezzük, majd az elegyet 30—35 °C-on vákuumban vagy nyomás alatt szűrjük. A szűrőn maradt, extrahált micéliumra 1 liter friss metanolt öntünk, majd közel szárazra leszivatjuk. 2,3 liter extraktlevet kapunk, amely a micéliumon levő összes hatóanyagot tartalmazza. Az extraktlevet 25 g aktívszénnel fél óra hosszat keverve derítjük. A derített oldatot szűrjük, és friss metanollal mossuk. A szűrt, derített oldathoz keverés közben 40 ml 60%-os kénsavat adagolunk, majd dietil-aminnalr 4,5—5,0 pH-ra állítjuk. Az össztérfogat 2,4 liter, ehhez 1,2 liter ionmentesített vizet adunk, majd fél óra hosszat visszafolyatás közben forraljuk, miközben a kivált primicin-szulfát csapadék feloldódik. Ezután 2—3 óra alatt 15—20 °C-ra, további 2—3 óra altt 2—5 °C-ra hűtjük. A kivált nyers primicinszulfátot vákuumban kiszűrjük, 2 ízben 100—100 ml ionmentes vízzel mossuk, majd 200 ml acetonban szuszpendáljuk. Szűrés után a kapott, nyers primicin-szulfátot vákuum szárítószekrényben vagy légköri nyomáson, 50—60 °C-on súly állandóságig (körülbelül 10—12 óra) szárítjuk. 40—41 g, 85—87% hatóanyag-tartalmú primicin-szulfátot kapunk. Kitermelés: 85—87%. 2. példa A nyers primicin-szulfát átkristályositása 2,0 liter metanolban keverés közben feloldunk 40 g (~ 2%) szilárd triklórecetsavat, és 40-45 °C-on 1 óra alatt 120-125 g nyers primicin-szulfátot. Az oldatot 30—35 °C-on 10 g aktívszénnel keverés közben derítjük, majd szűrjük, és 50 ml friss metanollal mossuk. A szulfátsóvá alakítást keverés közben 40 ml 60%-os kénsav hozzáadásával végezzük, majd dietü-aminnal 4,5—5,0 pH-értékre állítjuk. Az össztérfogat körülbelül 2 liter, ehhez 1 liter ionmentesített vizet adunk. Az elegyet fél óra hosszat visszafolyatás közben forraljuk, miközben a kivált csapadék feloldódik, és tükrösen tiszta oldatot kapunk. Az oldatot 2—3 óra alatt 15—20 °C-ra, további 2—3 óra hosszat 2—5 °C-ra lehűtjük. Nagyszemcsés, jól szűrhető anyagot kapunk, 3 ízben 200—200 ml ionmentesített vízzel mossuk, leszivatjuk, majd 500 ml acetonban szuszpendáljuk, és ismét leszivatjuk. Az átkristályosított primicin-szulfátot vákuumban vagy légköri nyomáson, 50-60 °C-on súlyállandóságig szárítjuk. 97-100 g gyógyászati célokra felhasználható primicin-szulfátot kapunk. Kitermelés: 95—98%. 6 3. példa Primicin-bázis előállítása nyers primicin-szulfátból 1,0 liter metanolhoz keverés közben 60 ml, 35- 40%-os vizes nátrium-hidroxid-oldatot és az 1. példa szerint kapott 200 g nyers, száraz primicin-szulfátot adunk, és fél óra hosszat 40—45 °C-on keverjük. A kapott oldatot 30—35 °C-ra hűtjük, 10 g aktívszenet adunk hozzá, és fél óra hosszat keverjük, majd szűrjük, és 100 ml friss metanollal mossuk. Szűrletként körülbelül 1,2 liter 165—170 g primicin-bázist tartalmazó oldatot kapunk, ehhez keverés közben 1 liter/óra sebességgel 4-szeres térfogatú ionmentes vizet adunk. Körülbelül 4 óra múlva a lassan kivált, nagyszemcsés primicinbázist kiszűrjük, 3 ízben 200 ml ionmentes vízzel mossuk, majd 500 ml acetonban szuszpendáljuk és szűrjük. A kapott primicin-bázist vákuumban vagy légköri nyomáson, 50—60 °C-on súly állandóságig szárítjuk. 165— 168 g 99,8%-os primicin-bázist kapunk. Kitermelés: 97-99%. 4. példa 2,0 liter metanolban keverés közben feloldunk 40 g (~ 2%) szilárd triklórecetsavat, és 40-45 °C-on fél óra alatt 100 g primicin-bázist. Ezután 30—35 °C-on hozzáadunk 10 g aktívszenet, fél óra hosszat keverjük, szűrjük, 50 ml friss metanollal mossuk. Az oldathoz a kívánt sónak megfelelő ásványi savból 60 ml-t adunk hozzá keverés közben, majd dietil-aminnal 4,5—5,0 pH-értékre állítjuk. Az oldat 50%-ának megfelelő, 1 liter ionmentes víz hozzáadása után fél óra hosszat visszafolyatás közben forraljuk, majd 2—3 óra alatt 15—20 °C-ra, további 2—3 óra alatt 2—5 °C-ra hűtjük az oldatot. A hűtés közben kikristályosodott primicin-sót kiszűrjük, 3 ízben 200—200 ml ionmentes vízzel mossuk, majd 500 ml acetonban szuszpendáljuk, szűrjük, és vákuumban vagy légköri nyomáson, 50—60 °C-on súlyállandóságig szárítjuk. 97-99 g primicin-sót kapunk. Kitermelés: 95-97%. 5. példa Primicin-bázis előállítása primicin-sóból A primicin-bázist bármely primicin-sóból a 3. példában leírtak szerint állíthatjuk elő. Kitermelés: 96—98%. A termék tisztasága 99,8%. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 4
