189757. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pszichofarmakológiai tulajdonságú peptidek előállítására
1 189 757 2 11. pGlu-Asn-Cys-Pro-Arg-Gly-NHj acetát előállítáM H -Cys-OH 450 mg (0,40 mmól) 10. lépésben kapott pepiidet 12,5 ml trifluor-eoetsav, 0,13 ml metánszulfonsav és 0P1 ml tioanizol elegy ében oldunk, és az oldatot 5 órán át keverjük. A reakdóelegyet ezután éterbe öntjük, a peptid olajos formában kiválik. A felülúszó folyadékot dékánt áljuk és az olajat éterrel kétszer elkeverjük. Az olajat ezután terc-butanol és víz 1 2 arányú elegyében oldjuk & a œ tát-formában lévő ioncserélő gyantával (Dovex 2X-8) kezeljük, majd fagyasztva szárítjuk. 100 mg anyagot kapunk. A fagyasztva szárított anyagot 10 ml 50%-osecetsavban oldjuk és 50 “Con 6 órán át keverjük, majd ismét fagyasztva szárítjuk. Az anyagot kromatográfiás eljárással tisztítjuk. 84 mg cím szerinti terméket kapunk. Rf: 0,14 (1-buíanol-ecetsav-víz 2:1:1 arányú futtatóelegy, Woelm szilikagél réteg). 2. példa 1. Z-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH3 HC1 előállítása H-CysG)H 2,6 g (3 mmól) Z-Gln-Asn-Cys(Scm)-Pro-LeuGly-NH2 — melyet az 1. példában leírtak szerint állítottunk elő, Rf értéke 0,6 (szilikagél réteg, 8 2 arányú diklór-metán-metanol futtatóelegy) - 30 ml dimetil-formamiddal készült oldatához 0,78 g (4,4 mmól) H-Cys-OH HCl-H2 O t adunk. Az elegyet 2,5 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd éterbe öntjük. Az olaj formájában kivált peptidet kis mennyiségű metanolban oldjuk, és Spehadex-szel töltött oszlopon kromatografálva tisztítjuk. Az eulálást metanollal végezzük. 0,65 g (24%) cím szerinti terméket kapunk. Rf: 0,36 (szilikagél réteg, 4:1:1 arányú 1-butanol— -ecetsav-víz futtatóelegy). 2. pGlu-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NHj acetát előállítása H-Cys-OH 0. 65 g (0,71 mmól) 1. lépésben kapott peptidet 75 ml trifluorecelsav, 12 ml metánszulfonsav és 025 ml tioanizol elegyében oldunk. Az elegyet 2 órán át keverjük, majd étert adunk hozzá. A kivált csapadékot éterrel kétszer elkeverjük és dekantáljuk. A szilárd anyagot terc-butanol és víz 1:1 arányú elegyében oldjuk, majd acetát-formában lévő Dovex 2X—8 ioncserélő gyantával kezeljük és fagyasztva szárítjuk. A fagyasztva szárított anyagot kromatográfiás eljárással tisztítjuk, Merck C-típusú, azonnal használható oszlopon, az eluálást 1-butanol—ecetsav-víz 3:1:1 arányú eleggyel végezzük. A kapott anyagot ezután Craig-féle megosztással tisztítjuk, 1 -butanol-ecetsav-víz 4:15 arányú elegyet haszn álva. 137 mg (22%) cím szerinti terméket kapunk. Rf:026 (1-butanol-piridin-ecetsav-víz 8:3:1:4 arány ú futtatóelegy .Woelm szilikagél réteg). 3. példa 1. Z-Gln-Asn-Cys-Pro-Arg(Mbs)-OtBuHCl előálltása H-Cys-OH 22 g (2,06 mmól) Z-Gln-Asn-Cys(Scm)-Pro-Arg(Mbi)-OtBu-t — melyet az 1 .példában leírtak szerint állítottunk elő, Rf értéke 0,94 diklór-metán-metanol-víz 70:305 arányú futtatóelegy ben, szilikagél rétegen - 20 ml metanolban oldunk, majd keverés közben hozzáadunk 0,35 g (1,96 mmól) H-Cys-OH HC1 H20-t és a reakdóelegyet 1 órán át keverjük. A peptidet 20 ml éterrel kicsapjuk. A folyadékot dekantáljuk és a szilárd anyagot 100 ml éterrel kétszer elkeverjük. A szilárd anyagot 200 ml diklór-metánban oldjuk és 2-szer 100 ml vízzel extraháljuk. A vizes fázist fagyasztva szárítjuk. 1,85 g (74%) cím szerinti terméket kapunk. Rf: 0,37 (diklór-metán—metanol-víz 70:305 arányú futtatóelegy, szilikagél réteg). 2. pGlu-Asn -Cys-Pro-Arg<)H-acetát előállítása H-Cys-OH 180 mg (0,16 mmól) 1. lépésben kapott peptidet 3,7 ml trifluor-ecetsav, 0,37 ml tioanizol és 0,9 ml metánszulfonsav elegyében oldunk és az elegyet szobahőmérsékleten 5 órán át keverjük. A reakdóelegyet ezután 25 ml éterbe öltjük, a kivált csapadékot leszűrjük és éterrel mossuk. A szilárd anyagot terc-butanol és víz 1:1 arányú elegyében oldjuk és acetát-formában lévő Dovex 2X-8 ioncserélő gyantával kezeljük. Az ioncserélő gyantát leszűrjük és az oldatot fagyasztva szárítjuk. A szilárd anyagot 10 ml 50%-os ecetsavban oldjuk, 50 °C-on 5 órán át keverjük, majd ismét fagyasztva szárítjuk. A terméket kromatográfiás eljárással tisztítjuk (Merck gyártmányú azonnal használható oszlopon), az eluálás 1-butanol-ecetsav—víz 1:1:1 arányú eleggyel végezzük. 47 mg (40%) cím szerinti terméket kapunk. Rf: 021 (2-butanol-piridin-25%-os ammónium-hidroxid—víz 2020:3:15 arányú futtatóelegy, szilikagél réteg). 4. példa Az.l. példa 11. lépésében leírt módon a Z-Gln-AsnGys-Pro-Leu-OtBu HG-t (Rf: értéke 0,12, H-Cys-OH 1-butanol—piridin-ecetsav—víz 82:1:4 arányú futtatóelegyben) pGlu-Asn-Cys-Pro-Leu-OH-acetáttá H-Cys-OH (Rf értéke 0,40, 1-butanol-ecetsav—víz 2:1:1 arányú futtátóelegyben,szilikagél rétegen) alakítjuk. 5. példa Hasonló módon állítjuk elő az alábbi peptidek acetátjait is: p-Glu-Asn-Cys-Pro-Lys-Gly-OH H-Cys-OH pGl u-Asn -Cy s -Pro -Lys -OH H-Cys-OH pGlu-Asn-Cys-Pro-Leu-OMe, és H-CysC)H pGlu-A:- -Cys-Pro-Leu-NHj H-Cys-OH. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 5
