189734. lajstromszámú szabadalom • Diagnosztikai készlet és alkalmazása dehidrogenázok és/vagy oxidázok kimutatására
1 hogy ez a vizsgálat 6 pH-érték alatt valóban nem végezhető el. A leírásban az LDH meghatározásával kapcsolatban tetrazóliumsók alkalmazását nem említik. Egyébként ez az ismert vizsgálat teljes általánosságban szérum-enzimek meghatározására, de nem a dehidrogenáz.ok kizárólag kórosan megnövekedett koncentrációinak meghatározására szolgál. Ennek megfelelően ez az ismert vizsgálat már nagyon csekély enzimkoncentrációkat is kimutat, és ennek következtében a dehidrogetiázok, illetve oxidázok normális és kórosan megnövekedett értékei közötti megkülönböztetést nem teszi lehetővé. A találmány feladata abban áll, hogy diagnosztikai készletet biztosítson dehidorgenázok kórosan megnövekedett koncentrációinak emberi, állati vagy növényi folyadékokban vagy váladékokban való kimutatására. E készletnek igen nagy diagnosztikai biztonságot kell szavatolnia, és különösen alkalmasnak kell lennie rosszindulatú daganatok felismerésére, továbbá a diagnózisnak a lehető legrövidebb időn belül elvégezhetőnek kell lennie. A találmány szerint a feladatot egy olyan diagnosztikai készlettel oldjuk meg, amely egy redox-színezéket megkötő hordozóból, valamint egy savas pH- értékre beállított anyagkeverékből áll, amely az adott dehidrogenázok megfelelő szubsztrátumot, egy hidrogénátvivő vegyületet és legalább egy redox-színezéket tartalmaz. A készletre jellemző, hogy a hordozó poláris csoportokat tartalmaz, és az anyagkeveréket pH-értéke az adott dehirogenáz kizárólag kórosan megnövekedett koncentrációinak kimutatására 5,0 alatt van és a pH-érték beállítása és fenntartása érdekében puffer-rendszert tartalmaz. Ez a diagnosztikai készlet különösen célszerűen alkalmazható olyan kóros elváltozások felismerésére, amelyeket dehidrogenázoknak sejten kívüli folyadékokban fennálló koncentrációjának növekvése kísér. Ilyen koncentrációváltozások a rosszindulatú daganatoknak már korai stádiumaiban fellépnek, amikor egy eredményes terápia kilátásai még igen kedvezőek. A diagnosztikai készlet nagyon különböző szervek rosszindulatú daganatait jelzi. így például többek között a tipikus női szervek, például a női genitális terület karcinómái felismerhetők. A készlet segítségével baktériumok, paraziták és gombák által előidézett fertőzések is kimutathatók. A találmány szerinti diagnosztikai készlet különös előnye a diagnózisok igen nagy előjelző értéke (prognózis-értéke). Nőkön végzett sorozatkísérletek során például a nemiszervek területén fennálló, az 1—IV. stádiumokban lévő, szövettanilag bizonyított karcinómák esetében úgy találtuk, hogy az összes diagnózisoknak kevesebb, mint 10%-a hamisan negatív. Ehhez járul az a kedvező körülmény, hogyha a találmány szerinti diagnosztikai készletet testen belül (intrakorporálisan), például a hüvelyben tampon alakjában alkalmazzuk, akkor igen jól elviselhető, és semmiféle nyálkahártyaingerlés nem lép fel. Ez azért meglepő, mert a várakozás ellenére a képződő színezék - felismerhető módon — nem hatol be a nyálkahártyába. E színezékképződéssel kapcsolatban speciális vizsgálatok — amelyek keretébe szövetmetszeteket is bevontunk — azt eredményezték, hogy a színezék képződése során és ezt követően meglepő módon 2 a hordozóanyagon marad, és ennek következtében semmiféle káros, másodlagos reakciót a vizsgált egyén testén vagy testében nem vált ki. Ezek az előnyök a találmány szerinti diagnosztikai készletet az egészségügyi politika szempontjából kívánatos szűrővizsgálatok céljára különösen értékessé teszik, mert ezek során nemcsak a lehető legmagasabb mértékű diagnosztikai biztonság szükséges, hanem az is, hogy a diagnosztikai eljárás mentes legyen a káros szekunder reakcióktól, és az alkalmazott módzser a lehető legkorszerűbb legyen. A diagnosztikai készlet kiemelkedő jó tulajdonságai a poláris csoportokat tartalmazó hordozóanyag és a hordozón lévő, alacsony pH-értékű anyagkeverék különleges kombinációjának tulajdoníthatók. Meglepő, hogy a differenciáldiagnosztika éppen ezért lehetséges, és e diagnosztikai módszerrel s kóros esetek nagy biztonsággal felismerhetők. A hordozó szerepének a diagnosztikai készlet szempontjából való nagy jelentőségét például az is mutatja, hogy a hordozó alkalmazása nélkül az anyagkeveréknek egy kórosan megnövekedett koncentrációjú dehidrogenázt tartalmazó folyadékkal végbemenő reakciója az említett, alacsony pH-tartományban nem játszódik le. A diagnózis céljára szolgáló folyadék az emberi, állati vagy növényi szervezet nagyon különböző területeiről származhat. A nemiszervek területén fennálló, rosszindulatú neoplazmák felismerése céljából például a hüvelyváladék vizsgálható. A diagnosztikai készlet azonban alkalmas például vérszérum, gyomor- és bélnedv, epefolyadék, bronchus-, prosztata- és húgycsőváladék, valamint köpet vizsgálatára is. Ha dehidrogenázként az LDH-t kell kimutatni, akkor előnyösen nátrium-laktátot alkalmazunk. Használhatók azonban más, megfelelő vegyületek is, például kálium-laktát vagy kálcium-laktát. A hidrogénátvivő vegyület olyan anyag, amely a redox-színezék — például egy tetrazóliumsó - redukcióját elősegíti. Ilyen hidrogénátvivő vegyület például aa NAD, a nikotinsavamid-adenindinukleotid-foszfát (NADP), a flavin-adenindinukleotid (FAD) és a flavinmononukleotid (FMN). Alkalmazhatók azonban más, a szakember számára jól ismert vegyületek is, amelyek például a laktátnak az a) reakcióvázlat szerint piruváttá való átalakulása során a NAD helyett az NADH- nak megfelelő redukált formába átvihetők. Abból a célból, hogy egy vizsgálandó folyadékban egy dehidrogenáz koncentrációját látható formába hozzuk, amennyiben ez a koncentráció a kóros küszöbértéket meghaladja, legalább egy redox-indikátornak — előnyösen egy redox-színezéknek — kell a hordozón lévő anyagkeverékben jelen (ennie. Színezékkomponensként például tetrazóliumsókat, benzidin-színezékeket, indofenolokat — például 2,6- -diklór-indofenolt vagy dibróm-indofenolt vagy ABTS-t vehetünk számításba. Megfelelő, speciális tetrazóliumsók az NBT, TNBT, MTT, INT, BT, TV, TT, NT, trinitro-TT, dinitro-TT, tetranitro-NT, tetranitro-BT, nitro-BT-metil (ebben a metoxiesoportot metilcsoport helyettesíti), dinitro-TV, 3<4- -bifenilil)-2,5-di(p-nitro-fenfl)-tetrazólium-klorid, nitro-NT, tetranitro-BTj.^) szimmetrikusan osztott tetranitro-BT), n*t- 3T;i<3,3,-dimetoxi4-bifenüüén> 2-(p-nitro-feniij-5-fenil-tetrazólium-klorid, nitro-TV, nitro-TT, 3-(p-jód-fenil)-5-nitro-fenil-2-fenü-tetra7.ólium-klorid, 5,5 -dinitro-NT, 5,5’-dinitro-BT, 5-nitro-3 189 734 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
