189726. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tansz-4aR- 5-n-propil-4,4a,5,6,7,8,8a-9-oktahidro- 1H(2H)-pirazolo [3,4-g]-kinolin előállítására
1 2 189.726 1. táblázat Transz-5-n-propil4/îâ^?i677^8,8a ,9-oktalüdro-2H(lH)pirazolo[3,4-g]kinolin-izomerek és a racemát relativ aktivitása Vegyület Dózis (mikrogramm/kg) Átlagos artériás vérnyomás %-os . változása (±) Transz4aR 0,1-7,7+ 1,6 1-14,3 ± 1.6 10-25,2 ±2,1 100-38,6 ±4,3 transz4aS 0,1-8,5 ± 0,8 1-5,1 ±0,8 10-5,0 ± 0,3 100 4,6 ± 0,3 1000-6,4 ± 1,1 transz-dl 1-12,7+ 2,2 10-22,4 ±0,7 100-32,0 ± 2,1 1000-52,2 ±6,9 Nyilvánvaló, hogy a transz-dl-5-n-propil4,4a,6,6- 7,8,8a,9-oktahidro-lH(2H)-prazolo[3,4-g]kino)in vérnyomáscsökkentő hatása teljes egészében a Ievovagy transz-4aR-sztereoizomertől ered. A következő kísérlet még közvetlenebb bizonyítékot szolgáltat arra, hogy a transz-dl-5n-propil4,4a,5,- 6,7,8,8a,9-oktahidro-lH(2H)pirazolo[3,4-g]kinolin gátolja a norepinefrin felszabadulását a perifériás szimpatikus idegvégződésekben. E kísérletet úgy végezzük, hogy spontán hipertenzív patkányok gerincvelőjét elroncsoljuk. E célból az állatok jobb szemüregén keresztül bevezetünk egy acélpálcát, és végigtoljuk a gerincoszlop teljes hosszában. Ezt a pálcát a kísérlet teljes ideje alatt a gerinccsatornában tartjuk. A gerincvelő elroncsolása után azonnal megkezdjük az állatok szobalevegővel való mesterséges lélegeztetését, e célra egy, a rágcsálók lélegeztetésére haszná - latos készüléket (Harvard, Model 680, maximális térfogat: 1 ml/100 g testsúly, 60 ciklus/perc) használunk. A gerinccsatornába helyezett pálcát arra használjuk, hogy stimuláljuk (serkentsük) a gerincagyból kiinduló szimpatikus idegek működését. A pálcának a nyaki és keresztcsonti szakaszba kerülő részét izoláljuk. A szimpatikus idegek működését egy stimulátorral (Grass, Model S44) gerjesztett, 0,25, 1,4 és 8 Hz frekvenciájú négyszöghullámokkal (feszültség: 50 V, 1 msec időtartam, 30 másodpercen át) stimuláljuk. A gerinccsatornába bevezetett pálca a stimuláló elektród, míg semleges elektródként egy, a jobb hátsó comb izomzatába behelyezett tűt használunk. A vázizomzat rángásainak meggátlása céljából intravénásán 1 mg/kg d-tubokurarint adagolunk. A szimpatikus idegműködés elektromos stimulálása hatására létrejövő diasztolés vérnyomás-változásokat a nyaki artériába helyezett kanülön keresztül követjük. A vizsgálandó vegyületeket két dózisszinten, intravénásán adjuk be négy - négy spontán hipertenzív patkánynak. Az alábbi II. táblázat adatai azt mutatják, hogy a kontrollként használt, elroncsolt gerincvelőjű spontán hipertenzív patkányokon a szimpatikus idegműködés 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 elektromos stimulálása vagy exogén (külső eredetű) norepinefrin intravénás adagolása egyaránt kiváltja a várt érszűkítő válaszreakciókat, amint ezt a diasztolés vérnyomás változása jelzi. Ha az így előkészített spontán hipertenzív patkányokat transz-dl-racemáttal előkezeljük, akkor ez a dózissal összefüggő módon csökkenti a neurogén (idegi eredetű) érszűkítő válaszreakciókat. Ez a csökkentés szelektív, ugyanis a vizsgált vegyület nem antagonizálja az exogén norepinefrin adagolásával kiváltott, a fentivel összehasonlítható mértékű érszűkítő válaszreakciókat. így az I. és II. táblázat adatai együttesen azt jelzik, hogy a transz-dl-racemát (és egyszersmind a transz-4aR-izomer, a racemát aktív összetevője) olyan dózisai, amelyek intakt spontán hipertenzív patkányokon vérnyomáscsökkentő hatást mutatnak, szelektíven gátolják a norepinefrin felszabadulását a perifériás szimpatikus idegvégződésekben. II. táblázat A transz-dl-5 -n-propil-4,4a ,5,6,7,8,8a ,9-oktahidro-lH(2H)pirazolo[3,4-g]kinolinnak a neurogén érszűkítő válaszreakciókkal szemben megnyilvánuló szelektív antagonizmusa Transz-dl-racce- A szimpatikus idegműködés elektmát (mikro- romos stimulálása által létrehozott gram/kg, i.v.) diasztolés vérnyomás-emelkedés (gmm) 0,25 Hz 1 Hz 4 Hz 8 Hz 0 34±3 100 14±2 1000 10+1 72±3 118±8 129+7 47±2 105+8 115±9 26+4 65+8 89+12 Transz-dt-raceinát (mikrogramm/kg i.v.) Az exogén norepinefrin adagolásával kiváltott diasztolés vérnyomás-emelkedés (Hgmm) 0,01 0,1 1 10 * meg/kg meg/kg meg/kg meg/kg 0 8+1 27±1 78+3 140±5 100 7+1 29±2 74+1 128±5 1000 10+1 30±2 80±1 140±4 A transz 4aR-5-n-propil4,4a ,5,6,7,8,8a ,9-oktahidro-lH(2H)pirazolo[3,4-g]kinolinnak nincs alfa-adrenerg receptor aktivitása. Ezt az alábbi kísérlettel mutathatjuk ki, amelyben a hatóanyag érszűkítő hatását (vagy ennek hiányát) elroncsolt gerincvelőjű spontán hipertenzív patkányokon a vérnyomás alapvonalának emelkedéseként mutathatunk ki, e kísérletben az érszűkítő hatás a vérnyomás emelkedéséhez vezet. A transz-dl-5-n-propil4,4a ,5,6,7,8,8a ,9-oktahidrolH(2H)pirazolo[3,4-gJkinolinnak és a transz4aR- sztereoizmernek a vérnyomásra gyakorolt, az érszűkítő hatás mértékének tekinthető hatását úgy határozzuk meg, hogy kontrollanyagként norepinefrint használunk. A mérést elvégezzük két továboi dopamin-agonistával (Pergolis és Lergotril) is, továbbá a 7-metilmerkapto-metil-transz-dl-5-n-propil4,4a,5,6,- 7,8,8a ,9-oktahidro-l H(2H)-pirazolo[3,4-g]kinolinnal is. Az alábbi III. táblázatban megadjuk e vizsgálatok eredményeit. A táblázat első oszlopában megadjuk a vizsgált vegyület nevét, a második oszlopban az alkal-4
