189708. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a VIII:C véralvadási faktor előállítására
1 2 189.708 II. Táblázat A heparin alkalmazott mennyisége 1,0 egység/nl 0,5 egységjmlx 0,1 egység!ml x Az A-jelzésű gyantá- 91 ± 6 ról való kinyerés 81 96 i 14 7-os hozama A B-jelzésű gyantá- 53+17 ról való kinyerés 48 53 + 5 %-os hozama (kumulatív hozam x = Egyetlen kísérlet. 3. példa Polielektrolit polimer/heparin komplexeket készí- 20 tünk az 1. példában használt A-jelzésű és B-jelzésű gyantákból, és vizes heparin-nátrium-só-oldatból, majd az így kapott komplexeket megszárítjuk. E gyanta/heparin komplexek alkalmazásával azután, exogén heparin hozzáadása nélkül, az 1. példában leírt módon végezzük el a vér frakcionálását. 25 E célból sertés heparin-nátrium-sót (1003 egység 50 ml vízben oldva) adunk a) 300 mg A-jelzésü gyanta 100 ml vízzel készült szuszpenziójához, illetve b) 50 g B-jelzésű gyanta «q 200 ml vízzel készült szuszpenziójához. Miaukét esetben a szuszpenziót szobahőmérsékleten (körülbelül 22—25 °C hőmérsékleten) 1 órán át keverjük. Ezután a gyanta/heparin komplexeket úgy különítjük el, hogy a szuszpenziókat Whatman 54 cellulóz-tartalmú szűrőpapíron szűrjük (e szűrőpa- _ 35 pírok a gyártó cég szerint a 20—25 jlí méretű részecskéket 98%-os hatásfokkal visszatartják), majd a kötetlen heparin eltávolítása céljából a kiszűrt anyagot háromszor 100 ml vízzel mossuk. A gyanta/heparin komplexeket megszárítjuk, és így használjuk fel a vér frakcionálásához. 40 A vér frakcionálási lényegében az 1. példában leírt módon végezzük, azzal az eltéréssel, hogy az ott alkalmazott gyanták helyett a gyanta/heparin komplexeket használjuk, és az elegyhez nem adunk exogén heparint. E módszerrel a VIII:C faktor alvadási egységekben kifejezett aktivitását az A-jelzésü gyanta-heparin komplexszel végzett kezelés után a szokásos kísérleti hibahatáson belül kvantitatív hozammal (117%) lehet kinyerni. A B-jelzésű gyanta/heparin komplexre való adszorpció és aludó után az aktivitás összhozama az eredeti plazmában mérhető aktivitáshoz viszonyítva 78,4%. A fenti 1 -3. példákban használt, A-jelzésű gyantát lényegében a 4 097 473. és 4 118 554. számú amerikai szabadalmi leírások 1. példájában, valamint a 4 157 431. számú amerikai szabadalmi leírás 12. példájában ismertetett módon állítjuk elő, az ott megadott reagensekkel és ezek moláris arányaival. A B-jelzésű gyantát lényegében a 4 157 431. számú amerikai szabadalmi leírás 1. példájában leírt módszerrel állítjuk elő, az ott megadott reagensekkel és moláris arányokkal. 4. példa A fenti 1-3. példákban kapotthoz hasonló eredményeket kapunk akkor is, ha dimetíl-amino-propil-amin helyett egyenértéknyi mennyiségű dietil-amino-etil-amint és/vagy N,N-bisz-(amino-propil)-metil-amin helyett egyenértéknyi mennyiségű N,N-bisz-(amino-propil)-etií-amint, és/vagy metoxi-propil-amin helyett egyenértéknyi mennyiségű etoxi-etil-amint használunk. A szakemberek előtt nyilvánvaló, hogy a jelen leírás ismeretében számos további példát meg lehetne adni, anélkül, hogy a jelen találmány szellemétől és körétől eltérnénk, és az ilyen további példák ugyancsak beletartoznak az alábbi szabadalmi igénypontok által meghatározott oltalmi körbe. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás a VIII:C faktort tartalmazó koncentrátumnak vérplazmából való előállítására, azzal jellemezve, hogy 1. vérplazmához vagy vérplazma-koncentrátumhoz exogén (külső eredetű) heparin jelenlétében 7,0 és 8,5 pll-érték mellett hozzákeverünk 0,01 súly% és 0,1 súly% közötti mennyiségű, etüén és maleinsav-anhidrid kopolímerizációja után előállított, 3 mól% és 10 mól% közötti mennyiségű N,N-bisz-(rövidszénláncú amino-alkil)-rövidszénláncú alkil-aminnal térhálósított, olyen vízolóhatatlan polielektrolitot, amelynek polimer láncához >0 mól% és 100 mól% közötti mennyiségű di-(rövidszénláncú alkii)-amino-rövidszénláncú alkil-imido-csoport kapcsolódik, 2. az így kapott, adszorbeált plazma-frakciótól elválasztjuk a felülúszó folyadékot, 3. az említett felülúszóhoz exogén heparin jelenlétében, 5,5 és 6,5 közötti pH-érték mellett hozzákeverünk 1 súly% és 10 súly% közötti mennyiségű, etilén és maleinsav-anhidrid kopolímerizációja útján előállított, és 3 mól% és 10 mól% közötti mennyiségű N,N-bisz-(rövidszénláncú amino-alkil)-rövidszénláncú al-55 kil-amin alkalmazásával térhálósított, olyan vízoldhatatlan polielektrolitot, amelynek polimer láncához 3 mól% és 7 mól% közötti mennyiségű di-(rövidszénláncú alkil)-amino-rövidszénláncú alkil-imido-csoport kapcsolódik, továbbá a fennmaradó összes szabad karboxilcsoporthoz és anhidrid-csoporthoz (1-4 60 szénatomos )-alkoxi-(l-5 szénatomos)-alkil-amino-7
