189706. lajstromszámú szabadalom • Javított eljárás interferon előállítására
1 189 706 2 sejtszusz penziókhoz a 2. Táblázatban szereplő hozamnövelő szereket adtuk. Az interferon kinyerését és meghatározását az 1. Példa szerinti módon végeztük. 5 À Namalwa Az indukciókor A hozamInterferon sejtek előadagolt honövelő szer hozam a kezelése zamnövelőkoncentrákontrolihoz során alkalszer ciója viszonyítva 10 kalmazott (mM) nátrium-butirát koncentráció (mM) 0 kontrol (adagolatlan)-1 15 0 acetanilid 2 3 0 N.N-dimetil-acetamid 5 3 0 dimetil-szulfoxid 140 2 0 N-metil-benzamid 4 3 20 0 tetrametil-karbamid 8,4 6 1 kontroll (adagolatlan) — 1 1 acetanilid 2 2 25 1 N,N-dimetil-acetamid 5 2 1 dimetil-szulfoxid 140 2 1 N-metil-benzamid 4 3 1 tetrametil-karbamid 8,4 3 30 35 3. Példa Dimetil-szulfoxid stimulátorként és hozamnövelőként egyaránt történő alkalmazása Az 1. példa szerint előállított Namalwa/WRL sejtszuszpenziót friss táptalajjal 1x10® sejt/ml koncentrációjúra hígítottuk. A tenyészetet két egyenlő részre osztottuk és az egyikhez 140 mM dimetii-szulfoxidot adtunk. Mindkét tenyészetet 48 órán át keverés közben inkubáltuk, majd 800 g-n centrifugáltuk és a sejteket friss táptalajban (3xl06 sejt/ 45 ml) szuszpendáltuk. Az interferon indukciót az 1. Példa szerint végeztük, és az egyik előkezelt és inkubált, valamint az egyik előkezeletlen indukált sejtszuszpenzióhoz 140-140 mM dimetil-szulfoxidot adtunk. Az interferon kinyerése és meghatározása 24 óra múltán az 1. Példa szerinti módon tör- 50 tént. A Namalwa sej Az indukciókor Interferontek előkezelésére hozzáadott dititer (lOgjo alkalmazott dimetil-szulfoxid referenciaegység metil-szulfoxid koncentrációja (ml) 55 koncentráció (mM) 0 (mM) 0 3,55 140 0 4,0 0 140 3,9 140 140 4,3 60 4. Példa Az interferonképződés kinetikája hozamnövelő szer jelen- illetve távollétében, butirátos előkezeléssel, illetve anélkül Az 1. Példa szerint előállított Namalwa/WRL sejtszuszpenziót friss táptalajjal 1x10® sejt/ml koncentrációjúra hígítottuk. A tenyészetet két egyenlő részre osztottuk és az egyikhez 1 mM nátrium-butirátot adtunk. Mindkét tenyészetet 48 órán át keverés közben inkubáltuk, majd 800 g-n centrifugáltuk és a sejteket friss táptalajban (3x10® sejt/ml) szuszpendáltuk. Az interferon indukciót az 1. Példa szerint végeztük és az előkezelt és indukált, valamint az előkezeletlen indukált sejtszuszpenziók feléhez 8,4-8,4 mM tetrametil-karbamidot adtunk. A tenyészetek másik fele nem kapott tetrametil-karbamidot. Az ilyen módon kapott négy csoportból (előkezelt, hozamnövelővel, előkezelt, hozamnövelő nélkül) kétóránként 800 g-n centrifugáltunk tenyészet-mintákat. A táptalajt eltávolítottuk és a sejttömeget alaposan lecsepegtettük. A sejteket eredeti térfogatúra friss táptalajban felvettük, majd tetrametil-karbamidot adtunk a sejtszuszpenzióhoz, amennyiben a centrifugálás előtt is volt benne. További két óra inkubálás után az interferont kinyertük és meghatároztuk az 1. Példa szerinti módon. Interferon titer (lOgi 0 referenciaegység/ml) Az induk Előkezeletlen Namalwa Előkezelt Namalwa ció és az insejtek (ImM nátriumterferon kibutirát nyerése köHozam8,4 mM Hozam8,4 mM zött eltelt növelőszer tetrametilnövelőszer tetramefilidő (óra) nélkül-karbamidnélkül-kar hantiddal dal 0-2 0,75 0,75 1,05 1,05 2—4 0,75 0,75 2,6 2,7 4-6 1,8 1,7 4,05 4,2 6-8 2,55 2,9 4,25 4,65 8-10 2,7 3,5 4,1 4,9 10-12 2,8 3,75 3,55 4,65 12-14 2,6 3,75 3,55 4,5 14-16 2,6 3,7 3,25 4,1 16—18 2,45 3,55 3,15 3,95 5. Példa Az Indukció során adagolt butirát hatása butirátos előkezeléssel illetve anélkül. Az 1. Példa szerint előállított Namalwa/WRL sejtszuszpenziót 800-g-on centrifugáltuk, a sejteket friss táptalajban felszuszpendáltuk (3x10® sejt/ml), majd elvégeztük az interferon indukciót az 1. Példa szerinti módon. Közvetlenül a Sendai vírussal való indukció után az alábbi táblázatban szereplő koncentrációban natrium-butirátot adtunk a sejtekhez. Az interferon kinyerése és meghatározása 24 óra múltán az 1. Példa szerinti módon történt. 5
