189660. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2,3,3a, 4,5,6,1H-hexahidro- indolo[3,2,1,-de]naftiridin enantiomerjeinek szétválasztására, és e vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 2 189.660 2. példa ()-2,3,3a ,4,5,6,1 H-Hexahidro-ondolo[3,2,1 -de)l ,5 naftridin a) A bázis felszabadítása a iobbraforgató izomer átkristályosítási anyalúgjából 2,3-bisz(4-metil-benzoil-oxi)-szukcinát alakjában Rotációs bepárlóban szárítjuk az lb) példa szerinti első átkristályosítás szűrletét, azután hozzáadunk 200 ml 10%-os ammónium-hidroxid-oldatot, majd 200 ml etil-acetátot. Néhány perces keverés után az elegyet fríttüvegen átszűrjük, a szerves fázist elválasztjuk, vízzel mossuk, vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk. végül rotációs bepárlóban, majd vákuumban töményítjük. Ily módon körülbelül 9,11 g narancsszínű olajat kapunk. b) Diasztereomer sók képzése (-)-2,3-bisz(4-metd-benzoil-oxi)-borostyánkősawal Mágneses keverövel, hűtővel felszerelt és olajfürdőbe helyezett 500 ml-es Erlenmeyer-lombikba a 2) példa szerint kapott vegyület 9,08 g-ját, melyet előzetesen 65 ml vízmentes etanolban oldunk, azután 1 óra múlva szobahőmérsékleten hozzáadjuk a (-)-2,3-bisz (4-metil-benzoil-oxi)-borostyánkősav 65 ml vízmentes etanollal készített oldatát. A kristályképződés megkezdődik még a hozzáadás befejezésé előtt. Ezt követően lassan a visszafolyatási hőmérsékletre hevítjük az elegyet, és hozzáadunk 140 ml Vízmentes.etanolt a kristályok tökéletes feloldása céljából. Ezután szűréssel eltávolítjuk az oldhatatlan kristályokat, a szűrletet felmelegítjük, majd szobahőmérsékletre, hagyjuk lehűlni. A képződött kristályokat firttüvegen kiszűrjük, és 50 °Con vákuumban szárítjuk. Ily módon 11,2 g fehér kristályt kapunk. c) Átkristályosítás ■ A fentiekben kapott kristályokat 95%-os etanolban többször átkristályosítjuk. Minden egyes átkristályosítás után elveszünk körülbelül 0,25 grammnyi mennyiséget, amelyből ammónium-hidroxi-oldat és kloroform segítségével felszabadítjuk a bázist a forgatóképesség meghatározása végett, öt átkristályosítás után a bázis forgatóképessége mintegy [cejj-j = -63,38° (c = 1,39, metanolban), a só forgatóképességc pedig körülbelül [<*]n = -89,21° (c = 1, metanol) éçték körüli 3. példa (-)-2,3,3a ,4,5,6,1 H-He xahidro-indolo[3,2,1 -de] 1,5 - -naftridin és metanászulfonátsója a) Diasztereomer sók képzése (-)-2,3-bisz(4-metil-benzoil)-oxi)-borostyánkősawal Az la) példa szerinti eljárással 34,41 g 250 ml vízmentes etanolban oldott olajszerű bázist 32,78 g 250 ml vízmentes etanolban Oldott (-)-2,3-bisz(4-metil-benzoil-oxij-borostyánkősawal reagáltatunk mágneses keverővei visszafolyató hűtővel és olajfürdővel ellátott 2 literes Erlenmeyer-lombikban. A borostyánkősav hozzáadásával befejezése előtt kristályképződés indul meg, szobahőmérsékleten. Az elegyet a visszafolyatási hőmérsékletére melegítjük, és 220 ml vízmentes etanolt adunk hozzá, az oldódás elősegítésére. Az oldhatatlan kristályokat szűréssel eltávolítjuk, majd a szűrletet ismét felmelegítjük, majd szobahőmérsékleten állni hagyjuk, kristályképződés céljából. Azután a kristályokat firttüvegen kiszűrjük, és vákuumban 50 °C-on szárítjuk. Ily módon 35,47 g súlyú kristályokat kapunk. b) Átkristályosítás Az le) példa szerinti eljárással, négy átkristályosítási művelet után a bázis forgatóképessége [a]p. = ■ -60,5° (c = 1,15, metanolban), a sóé [otj^ = 417,9° 5 körüli.(c = l, metanol), c) Metánszulfonát Mágneses keverővei ellátott 250 ml-es lombikba 1,15 g 20 ml etiléterben oldott (olaj) enantiomert helyezünk, és gyorsan ekvivalens mennyiségű, azaz 0,52 g 6 ml etanolban oldott metánsziüfonsavat adunk ' 0 hozzá. Kristályok képződnek, melyeket 50 °C hőmérsékleten vákuumban történő szárítás előtt még félórán át tovább keverünk. Ezután 19 ml vízmentes etanolból átkristályosítjuk, ily módon 1,12 g metánszulfonátsót kapunk, amely,?219—221 °C-on olvad. 1 g A. forgatóképesség: [«]"'*() = -22,0 (c = 1, metanol). Az elemanalízis, valamint az NMR- és IR-vizsgálatok. alátámasztják a vegyület szerkezetét. d) A vegytisztaságellenőrzése Az ld) példa szerinti eljárással kapott mentil-karbamát gázfázisú kromatogramja egyetlen csúcsot mu- 20 tató görbét ad. A találmány szerinti vegyületekkel farmakológiai vizsgálatokat végeztünk, hogy meggyőződjünk gyógyászti jelentőségükről. Kis nyomás okozta hipoxia CDI egértözset oxigénszegény- atmoszférában tar- 25 tottunk, melyet 5,25% oxigénnek megfelelő 190 flgmm nyomású részleges vákuummal állítottunk elő. Az állatok túlélési idejét feljegyeztük. Ez az idő megnövekszik a szövetek, különöseníaz agysejtek oxigénellátását elősegítő szerek hatására. A vizsgált vegyületek 10 perccel a kísérlet előtt intraperitoneálisan, több adagban juttatt"k az állatok szervezetébe. A túlélési idő százalékos növekedését a nem kezelt állatokéval összehasonlítva kiszámítottuk. A túlélési időt 100%-kal meghosszabbító átlagos adagot (DA^qq) grafikusan meghatároztuk. A DA.qq értéke 21-23 35 mg/kg-nak, a DA<-0 értéke pedig 7 — 10 nig/kg-nak adódott. Általános isémia-kísérlet egereken Az állatok túlélési idejét mértük, 0,1 ml telített magnézium-klorid oldat farokvénába történő injektálását követően. Az injekció hatására beálló szívmű- 40 ködés leállása az agy isémiáját váltja ki. A túlélési idő az az időtartam, amely a magnézium-klorid beadásától az egyes egerek utolsó légzőmozgásáig— mint a központi idegrendszer működésének utolsó jeleként tekintett reakcióig - eltelik. A találmány szerinti vegyöleteket tartalmazó gyógyszerkészítményekkel - a matgnézium-klorid injekció beadása előtt 10 perccel — intraperitoneálisan kezelt állatok túlélési idejét összehasonlítottuk azon állatok túlélési idejével, melyek csak a készítmény vivőanyagát kapták. 5Q Az állatok tizes csoportokba osztva kapták a kezelést, és az egyes csoportok átlageredményeiből rajzolt görbe alapján grafikusan meghatároztuk a hatóanyagnak a testsúlykilogrammra vonatkozó, milligrammban kifejezett ún. hatásos adagját, mely a túlélési időt 3 másodperccel meghosszabbította (DE^). 55 A túlélési időtartam 3 másodperces megnövekedése statisztikailag kifejező és reprodukálható is. A találmány szerinti vegyületek DE-j értéke 7 és 10 mg/kg között van. A találmány szerinti vegyületek farmakológiai vizsgálata azt mutatja, hogy e vegyületek antianoxiás ha- 60 tással rendelkeznek, a tudat zavarainak, különösen az 3
