189610. lajstromszámú szabadalom • Eljárás maltoheptaoz-származékok előállítására
1 adása után keverés közben 30 ml 0,1 o nátrium-metilát-oldattal elegyítjük, és 16 órán át szobahőmérsékleten keveijük. A tennék 20 perc múlva kezd félig kristályosán kiválni. Végül 200 ml acetonnal elegyítjük, 4 °C-ra lehűtjük és szűrjük. A terméket 160 ml vízben feloldjuk, aktívszénnel derítjük, és hidrogénciklusú Dowex 50 katíoncserélő gyantával keverve sómentesítjük. Kitermelés: 5,6 g (91%) színtelen UofUlzátum. [a]gobahőfok = + 176 ° (c = 10.víz). A tennék tartalmaz még némi szabad maltoheptaózt és -nagynyomású folyadékkromatográfiás analízis szerint (254 nm-en detektálva) - még 2 ultraibolya-pozitív szennyezést. Ezek térhálósított dextránon (Scphadex LH 20) végzett kromatografálással vízzel eluálva választjuk el. 2. példa (p-Nitro-fenil)-a-D-maltoheptaozld előállítása a) Peracetil-(p-nitro-fenil>0!-O-maltoheptao/id 13,6 g (20 mmól) l.a) példa szerint előállított peracetil-maltoheptaózt 11,9 g (100 mmól) p-nitro-fenollal együtt feloldunk 90 ml vízmentes benzolban, és keverés közben nedvesség kizárása mellett 10,4 g = 4,5 ml (40 mmól) ón(IV)-kloriddal elegyítjük. Ekkor voluminózus massza csapódik ki, amely azonban melegítéskor újra oldatba meg. A reakció elegyet 1 órán át forraljuk, visszafolyató hűtő alatt. Lehűtés után nyúlós massza válik ld, amely 80 ml etil-acctát hozzáadására újból oldatba megy. Az oldatot keverés közben 180 ml 2 n nátrium-karbonát-oldatba öntjük, ekkor ón-oxid-hidrát válik ki. Ezt kevés aktívszén hozzáadásával leválasztjuk. A vizes fázist elválasztjuk, és a szerves fázist alaposan átmossuk, utoljára telített nátrium-klorid-oldattal. Szárítás és bepárlás után gyantaszerű terméket kapunk, amelyet etanolból kristályosítunk. Kitermelés : 6,2 g (41%). Olvadáspont: 100 °C (bomlás). [a]szobahőfok = ♦ 131° (c = 1; kloroform). A terméket úgy is előállíthatjuk, ha a reakciót kloroformban vagy ón(IV).klorid helyett titán(IV)-kloriddal végezzük. b) (p-Nitro -fenil )-a-D-maltoheptaozld 5,5 g (7 mmól) peracetil-(p-nitro-fenil>maltoheptaozidot 100 ml vízmentes metanolban szuszpendálunk, és 5 ml körülbelül 1 n nátrium-metilát oldattal elegyítjük. A kiindulási anyag mézszerűen elfolyik, és lassan feloldódik. Egy idő múlva megindul a dezacctilezett tennék kristályos kiválása, ami éjszakán át tartó keverés után teljessé válik. Kiszűrjük, metanollal mossuk, és megszárítjuk. Kitermelés: 2,8 g (86%). [ajgobahőfok = +124° (c = 0,6. víz). A terméket térhálósított dextránon (Scphadex LH 20) vízzel eluálva tisztítjuk. így 1,2 g (45%) terméket kapunk, amely enzimes vizsgálatban aktív. A vegyületet az 1. példa szerinti a-fenll-maltoheptaozid nitrálósavval végzett nitrálásával Is előállítottuk a Bull.Chem. Soc. Japan, 34., 718 (1961)szerint. Mononltro-fenol helyett dlnltro-fenol alkalmazásával a megfelelő (dinitro-fenil)-vegyületeket kapjuk. 2 3. példa (p-Nitro-fenflj-a-maltoollgoszacharidok Bacillus macerans-amflázzal (E.C. 2.4.1.19 Bac. mac. DSM 24-ből) végzett enzimatikus szintézissel A Bacillus macerans-amíláz hidrolitikus és ciklizáló hatás mellett giükozíl-transzferáló tulajdonságokkal is rendelkezik, ami felhasználható oligoszacharidok és származékaik szintézisére (Methods in Carbohydrate Chemistry II, 347). (jp-Nitro-fenil)-ollgoszacharfdok szintézisére ezt az eljárást a következőképpen optimalizáltuk: 680 mg Bacillus macerans-amflázt (E.C. 2.4.1. 19. Bac. mac, DSM 24-ből) (liofolizátum) (0,46 egység/ /mg bemérés, a proteintartalom 28,5%, (p-nitro-fenil> -a-D-glükozid hasító aktivitástól mentes), 400 mg a-D-(p-nitro-fenil)-glükozidot, 3.5 g a-ciklodextrint és 70 ml 6,2 pH-jú 0,01 mólos Sörensen foszfátpuffert elegyítünk. Az elegyet 24 órán át 37 °C-on in kubaijuk. Az a-és a keletkezett a-ciklodextrlnt utána feltisztulásig leválasztjuk a tetraklór-etilénnel képzett zárványvegyületen át. Térhálósított dextránon (Sephadex LH 20) végzett kromatografálás után 50 mg (p-nitro-fcnil)-maltoheptaozId liofilizátumot kapunk, amely amilázrvizsgálatban magas aktivitású. 4. példa Maltoheptait előállítása 10 g maltoheptaózt feloldunk 50 ml vízben, apránként hozzáadunk 2 g nátrium-bórhidridet, és 75 percig keveijük szobahőmérsékleten. (Redukáló cukor próba negatív.) A nátriumot hidrogéncíklusú Oowex 50 kationcserélő gyantán végzett kromatografálással távolítjuk el. (Az ioncsere után az oldat pH-ja 4,5.) Az átfolyatott oldatot vákuumban bepároljuk, és metanol/víz eleggyel (a víz a termék oldásához kell) többször feloldjuk és bepároljuk a bórsav metil-észterként való eltávolítása céljából. A végén semleges oldatot llofilizálunk. Kitermelés; 9 g (90%) (redukáló cukrot nem tartalmaz). Tartalom (enzimesen meghatározva) glükózból 86,1%, szorbitból 89,0%, víz 8,5%. 5. példa Maltoheptonsav előállítása 11.5 g (0,01 mól) maltoheptaózt és 6 g bárfum-benzoátot adunk 150 ml vízhez. Keverés és hűtés közben 1 ml brómot nitrogéngázzal kiűzzük, és utána 4 ml 4 n kénsav-oldatot és kevés aktívszenet adunk hozzá, szűrjük és a szűrietet kloroformmal extrahál-Íuk a benzoesav eltávolítása céljából. A vizes oldatíoz 3,2 g ezüst-karbonátot adunk, és keverjük (pH= = semleges). Az oldatlan sókat kiszűrjük, és a tiszta oldatot átengedjük 20 ml hidrogén ciklusú Ambedite JR gyantán. A savas eluátumot azonnal nátrium■hldroxiddal semlegesítjük és llofllizáljuk. Kitermelés: 8 g (72%). Tartalom (enzimesen meghatározva) glükózból 85 %, glükonsavbóí 80 %, víz 9,3%. 189.610 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 3
