189609. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vírusellenes hatású új purin-származékok és az ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 189 609 2 2/b kísérlet Az acyclovir orális adagolása Az acyclovirt steril desztillált vízben oldottuk 2 mg/ml koncentrációban, kis mennyiségű nátrium- 5 ■hidroxid hozzáadásával, és 42°C-ra melegítettük az oldódás elősegítése végett. A hörcsögöknek 5 napon át, a fertőzés előtt 5 órával kezdődően olyan ivóvizet adtunk, mely 2 mg/ml koncentrációban tartalmazta az acyclovirt. Az orális kezelés megközelítőleg 100 mg/kg/nap dózisszintet jelentett. A kontrollcsoport 11 hatóanyagot nem tartalmazó ivóvizet kapott. Eredmények 15 Csoport 457U koncentráció (mg/ml) 759U koncentráció (mg/ml Átlagos fogyasztás mg/kg/nap Kumultatív mortalitás (15-ből) a 2 3 4* naDon 1-3 0,075 6,6 0 0 0 4-6 0,075 — 6,8 0 1 1 7-9 — — — 0 9 14 10*-0 0 0 Következtetések Az acyclovir EHV-1 vírussal szemben mutatott hatékonysága csekélynek bizonyult, ha a kezelést orálisan végeztük, 5 napon át 100 mg/kg/nap dózisszinten, ezzel ellentétben a 759U vegyület tökéletes hatást mutatott 13 mg/kg/nap dózisszinten, orális adagolással, és 3 mg/kg/nap dózisszinten korlátozta az elhullások számát. 16. példa A 759U és 6-amino-analógja (457U) in vivo hatékonyságának összehasonlítása a ló rhinopneumonitis vírusával szemben. Anyagok és módszerek Hörcsögök 50 híg WO/CR szíriai hörcsögöt randomizáltan (találomra), 10, egyenként 5 állatból álló csoportra osztva ketrecekben helyeztünk el, és az állatoknak ad libitum adtunk vizet és táplálékot (magkeveréket). A hörcsögök súlyát megmértük a kezelés előtti 3 napon, majd a 0., 4. napon és/vagy az elhullás vagy leölés időpontiában. Az ivóvíz-fogyasztást feljegyeztük a kezelés előtti 3. naptól a 0. napon át a kezelés utáni 4. napig. Vírus és fertőzés Az EHV-1 Pneumabort vakcina-vírustörzset tízszeres hígítás formájában tároltuk, és tovább hígítottuk tízszeresére foszfáttal pufferolt konyhasóoldattal. A 0. napon az 1-9. csoportokba tartozó hörcsögöknek 0,2 ml virus-inokulumot adtunk szubkután úton a bal csípőbe: ez egyenértékű körülbelül 2 x 105 plakk képző egységgel. Vegyület és kezelés mód A 457U és 759U vegyületeket 0,075 mg/ml koncentrációban ivóvízben oldottuk. Feltételezve, hogy az átlagos napi fogyasztás 134 ml/kg testsúly, ez mintegy 10 mg/kg napi dózist jelent. Az állatoknak a fertőzés előtti 5. órától kezdődően 96 órán át hatóanyagot tartalmazó ivóvizet adunk, amint ez az alábbiakból látható. Csoport Hatóanyag 1-3 759U 4-6 45 7U 7-9 kontroli-fertőzött 10 kontroli-fertőzés nélkül Eredmények Az alábbi táblázatban összegeztük a kumulatív (halmozott) mortalitás alakulását. A hatóanyag felvételét (fogyasztását) az állatok testsúlyából és a kí- 35 sérlet során feljegyzett ivóvízfogyasztásból számítottuk ki. A 15 457U vegyülettel kezelt hörcsögök közül csak 1 hullott el vírustól előidézett hepatitis következtében. A 15 kezeletlen kontrollállat közül 14 elhullott, a 759U vegyülettel kezelt 15 hörcsög 40 között egyetlen elhullás nem fordult elő. Állat- Oi ális kezelés Napok - kumultatív (halmoszám a acyclovir mozott) mortalitás csoportban mg/kg/nap 2 3 4 5 6 12 100 0 2 5 7 8 12 kontroll 0 6 12 12 12 50 55 Következtetések A 457U vegyület, azaz a 759U 6-amino-analógja, ivóvízben orálisan, megközelítőleg 7 mg/kg/nap dózisszinten adagolva majdnem tökéletesen megszüntette a szíriai hörcsögök EHV-1 vírusok által előidézett mortalitását, a 759U vegyület pedig teljesen 60 meggátolta az EHV-1 előidézte mortalitást. 12
