189600. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új policiklusos éter-származékok és az azokat tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 . 189 600 2 fázist vákuumban bepároljuk úgy, hogy 30,3 liter olajat kapjunk. Az olajat vákuumban, egy forgó bepárlóban tovább koncentráljuk. A maradék szirupot heptánban szuszpendáljuk, szilikagéllel öszszekeverjük és szűrjük, néhányszor heptánnal átmosva. A mosott szűrőpogácsát az 1. példában leírtak szerint dolgozzuk fel, így 300 g olajat kapunk. Az olajat kevés kloroformban feloldjuk, az oldatot egy Lapp szűrőre öntjük, amely 3,5 kg szilikagélt (Merck, 60-as finomság) tartalmaz. Ezután a szilikagél ágyat egymás után 18,4-18,4 liter kloroformmal, etil-acetáttal és acetonnal mossuk. A frakciókat vékonyréteg kromatográfiával vizsgáljuk. A terméket, csaknem kizárólag, az etilacetátos frakcióban találjuk. A többi frakciót kiöntjük, az etil-acetátos frakciót vákuumban szárazra pároljuk, így 150 g koncentrátumot kapunk. Ezt tovább tisztítjuk kromatográfiásan, egy 8,0 x 1000 cm-es oszlopon, amely etil-acetátos szilikagél (Merck, 60-as finomság) töltetet tartalmaz. Az oszlopot etil-acetáttal eluáljuk, 1 liter frakciót 60 ml/ perc sebességgel nyerünk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, és vákuumban bepároljuk, ily módon 85 g terméket kapunk. A terméket ezután átengedjük egy olyan oszlopon, amely egy kg Sephadex LH-20-at tartalmaz: majd metanollal eluáljuk 25 ml/perc átfolyási sebességgel. 300 ml-es frakciókat veszünk le. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, és az oldószert elpárologtatva 30 g szilárd anyagot nyerünk. Ezt 500 ml kloroformban oldjuk, az oldatot megfelelő térfogatú 5%-os NaH2P04 pufferrel mossuk, melynek pH-ját 4,5 értékre állítottuk be 85%-os foszforsavval. A szerves fázist elválasztjuk, 500 ml 5%-os Na2HP04 pufferrel mossuk, melynek pH-ját 9-re állítjuk be IN nátrium-hidroxiddal. Ezután az extraktumot vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk, és vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot acetonban oldjuk, és egy hűtőszekrényben hagyjuk kikristályosodni. A kristályokat szűréssel elkülönítjük és nagy vákuumban, szobahőmérsékleten szárítjuk, ekkor 14 g 53,607 antibiotikum nátrium sót kapunk. Olvadáspont: 199-204 °C. Optikai forgatóképesség: [a]D + 44° (c = 1, kloroform), [a]D + 37 ' (c = 1, metanol). Ultraibolya spektrum: Lmax 233 nm (metanol) Eí*cm = 212 Infravörös spektrum (KBr) mikron: 2.95, 3.42, 6.00, 6.37, 6.85, 7.14, 7.30, 7.65, 7.90, 8.10, 9.05, 9.67, 10.00, 10.18, 10.53, 11.15, 11.40, 11.75, 13.25. Az infravörös spektrum az 1. ábrán látható, x tengely: hullámhossz, mikronban; y tengely: %os transzmittancia (fényáteresztés). Elemanalízis: C: 57,54; H: 7,74; N: 0,0 KH2P04 (pH = 4,5) és K2HP04 puffert (pH érték pH = 9-re beállítva IN nátrium-hidroxiddal) alkalmazva a fenti eljárásban, hasonló módon az 53,607 vegyület kálium sóját kapjuk meg. Hasonló módon eljárva, ha (NH4)H2P04 és (NH4)2P04 puffereket használunk, az ammóniumsót kapjuk meg. 3. példa Az előzőek szerint kapott 53,607 antibiotikum nátiium só egy részét etil-acetátban oldjuk, vizet adunk hozzá és a vizes fázis pH-ját 85%-os foszforsavval pH = 4,5 értékre állítjuk be. A szerves fázist elválasztjuk, nátrium-szulfáton szárítjuk és vákuumban bepároljuk, ily módon megkapjuk az 53,607 antibiotikum szabad savas'alakját. Olvadáspont: 84-94 °C. Elemanalizis olyan minta alapján, amit nagy vákuumban, szobahőmérsékleten egy éjszakán át szárító tunk: C 64,69; H 8,91; N: 0,0. A sav vízben oldhatatlan, kloroformban, etilacetátban, metanolban és metil-izobutii-ketonban oldódik. [a]D + 74,5° (c = 1, kloroform), [a]u + 49,7° (c = 1, metanol). Ultraibolya spektrum: Lmax 233 nm (metanol) Ei TM= 198 Infravörös spektrum (KBr) mikron: 2.95, 3.45, 6.00,6.85,7.28,8.13,9.05,9.67, 10.20, 10.55. 11.15, 11.48. A spektrum a 2. ábrán látható. (Az x és y tengely értelmezése ugyanaz, mint az 1. ábrán.) A báriumsót úgy állítjuk elő, hogy 80 ml etilacetátban feloldott 2,0 g szabad savat 2,4 g báriumhidroxid-oktahidrátot tartalmazó azonos mennyiségű vízzel összerázunk. A rétegeket szétválasztjuk, a szerves fázist Ba(0H)2.8H20 frissen készített oldatéval mossuk, nátrium-szulfát felett szárítjuk és vákuumban bepároljuk, ily módon megkapjuk a kívánt 53,607 antibiotikumsót. A kálcium sót is a fenti eljárással állítjuk elő, azzal a különbséggel, hogy bárium-hidroxid-oktahidrát helyett kalcium-hidroxidot alkalmazunk. 4. példa Az 1. példában leírt eljárást alkalmazzuk, de 4 térf% oltóanyagot használunk négy literes fermentorok esetében, ezek mindegyike az alábbi összetételű steril tápközegből 2 litert tartalmaz: A da lékanyag gramm jliter Keményítőcukor 10 Kukoricakeményítő 10 Szójaliszt 10 Kákium-karbonát 1 Kukorica fermentálható szilárd részei 5 Nátrium-klorid 5 pH = 7,0 A fermentációt két napon keresztül, 36 °C-on hajtjuk végre, 1700 fordulat/perc sebességű keveréssel, a levegőztetés sebessége: 2 térfogategység levegő percenként a táptalaj térfogategységére vonatkoztatva. A teljes táptalajt extraháljuk. Kloroformmal és az 1. példában leírtak szerint dolgozzuk fel, ekkor megkapjuk az 53,607 antibiotikum nátrium, kálium és kálcium sóinak keverékét. Ha a fenti eljárást megismételjük, de a fermentációs közeg keményítőcukor helyett glicerint tartalmaz a kukorica fermentálható szilárd részei helyett pedig hallisztet vagy gyapotmag-lisztet, és a fer-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
