189548. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A-4696 antibiotikum-komplex és egyes komponenseinek előállítására
1 189 548 2 növekedés gyorsabb és a tápanyag-hasznosítás nagyobb, mint azoknak az állatoknak az esetében, amelyek ugyanazt a tápot kapták, de az aktív komponens nélkül. Az „alap-táp” kifejezés az állat által elfogyasztott össz-táplálékot jelöli; ennek összetevői a különböző tápanyagok, koncentrátumok, adalékok, ásványi anyagok, vitaminok vagy gyógyászati készítményeket tartalmazó premixek, durva őrlésű táplálék stb., amelyek kielégítik az állat táplálkozási igényeit. A baromfi és sertés vonatkozásában tipikus alap-tápok találhatók a 4 115 552 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban. A találmány szerinti eljárás egyik fontos foganatosítási módja esetében az A-4696 antibiotikum B,, B2, B3, C,a, C3 vagy E, komponensét vagy ezek egy megfelelő származékát vagy keverékét orálisan visszük be, megfelelő tápanyagban, kb. 2-kb. 200 g/tonna össztáplálék mennyiségben, fokozott tápanyaghasznosítás és növekedést elősegítő aktivitás biztosítására. A találmány szerinti aktív A-4696 antibiotikum komponenseknek az állati táplálékhoz való hozzáadását előnyösen úgy hajtjuk végre, hogy megfelelő táppremixet készítünk (amilyet pl. a 4 115 552 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás ismertet), amely kb. 1-200 gramm A-4696 antibiotikum B,, B2, B3, CIa, C3 vagy E, komponenst vagy ezek megfelelő származékát vagy keverékét tartalmazza a premix 1 kg-jára számítva. A kiegészített premixet ezután bevisszük a végső táplálékba. Egy másik megoldás szerint egy közti koncentrátumot vagy tápanyag-adalékot, amely az aktív komponenst tartalmazza, adhatunk hozzá a táphoz. Bár az A-4696 antibiotikum új B,, B2, B3, C,a, C3 és E[ komponense több különböző módon használható fel, különösen hatékonyak antibiotikumként. Ilyen típusú aktivitást mutató anyagokra mindig szükség van a mikrobiális alapú egészségügyi problémák megoldásához, ezeket általánosságban véve. A találmány szerinti új antibiotikum komponenseket az A-4696 antibiotikumból különítjük el, ez utóbbit pedig úgy állítjuk elő, hogy egy vagy több Actinoplanes törzset aerób körülmények között, megfelelő táptalajon addig tenyésztünk, amíg a közegben jelentős antibiotikus aktivitás halmozódik fel. Az antibiotikum komponenseket különböző megfelelő elkülönítési és tisztítási eljárások alkalmazásával nyerhetjük ki. Az A-4696 antibiotikum termeléséhez felhasznált mikroorganizmust az Actinoplanaceae családhoz tartozó Actinoplanes missouriensis törzsként azonosítottuk. Az Actinoplanes mikroorganizmus család az Actinomycetales rendhez tartozik, amelyet elsőként Dr. John N. Couch írt le (Jour. Elisha Mitchell Sei Soc., 65, 315-318, 1949 és 66, 87-92, 1950; Trans. New York Acad. Sei., 16, 315-318, 1954; Jour. Elisha Mitchell Sei. Soc., 71, 148-155 és 269, 1955; Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology, 7. kiadás, 825-829, 1957; és Jour. Elisha Mitchell Sei. Soc., 79, 53-70, 1963. Az Actinoplanes missouriensis törzsek biológiailag tiszta tenyészeteit - amelyek felhasználhatók az A-4696 antibiotikum előállítására abból a célból, hogy a termelést követően elkülönítsük az A-4696 antibiotikum B,, B2, B3, Cla, C3 és E, komponenseit - az American Type Culture Collection-ben (Rockville, Maryland) helyeztük letétbe. Ezek a törzsgyűjtemény részét képezik és itt a köz számára korlátozás nélkül hozzáférhetők, ATCC 31680, ATCC 31682 és ATCC 31683 számon. Az ATCC 31682 törzs az A-4696 antibiotikum abból a célból végzett tenyésztésére használható, hogy abból a B, és a Cla A-4696 antibiotikum komponenst különítsük el; az ATCC 31680 törzs a B2 és C3 A-4696 antibiotikum komponens elkülönítése szempontjából hasznos, és az ATCC 31683 törzs a B3 és E, A-4696 antibiotikum komponens elkülönítéséhez alkalmazható. Az ATCC 31680, ATCC 31682 és ATCC 31683 Actinoplanes missouriensis törzsek a következőkben részletezett fizikai és tenyésztési tulajdonságokkal jellemezhető. A három törzset mutáció-sorozattal állítottuk elő az ATCC 23342 törzsből, amelyet a 4 115 552 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás ismertetett korábban. A találmány szerinti eljárásban alkalmazott törzsek hasonló szubsztrátot vagy micéliumot képeznek és morfológiai tulajdonságaik alapján lényegében nem különböztethetők meg a kiindulási törzstől. Nem figyelhetők meg szekunder (lég-) micéliumok, sem sporangiumok, ezenkívül az olyan technikák, mint a pollen-szemcséken való tenyésztés, ugyancsak nem eredményeznek sporangiumokat. A találmány szerinti eljárásban alkalmazott törzseket főként tenyésztési jellemzőik, különösen a primer micélium pigmentációja különbözteti meg. Az ATCC 31680 törzs micéliuma narancsszínű, amely a mérsékelt-barnás narancstól az erős narancsszínig terjed, a táptalajtól függően. Az ATCC 31682 és az ATCC 31683 törzs nem rendelkezik ilyen megkülönböztető színnel és sárgás-szürke micéliumot termel. Az ATCC 31680, ATCC 31682 és ATCC 31683 törzs taxonómiai vizsgálatára alkalmazott módszerek a szakember számára ismertek. Ezek többnyire olyan módszerek, amelyeket a Shirling és Gottlieb által (Intern. J. of Systematic Bacteriol. 16(3), 313-340, 1966) leírt International Streptomyces Project (ISP) javasol. Az enzim-meghatározásokat Biazevic és Ederer módszerei szerint végeztük (Principles of Biochemical tests in Diagnostic Microbiology, J. Wiley and Sons, Inc., New York, 1975). A színek neveit, a rövidítéseket és számokat Kelly és Judd ISCC-NBS módszere szerint választottuk meg (The ISCC-NBS Centroid Color Charts Standard Sample Ne 2106, U.S. Dept, of Commerce, National Bureau of Standards, Washington, D.C., 1976). A lizozim-rezisztenciát és a kazein, eszkulin, hipoxantin, tirozin és xantin bontást Berg eljárása szerint (Appl. Microbiol. 25, 665-681, 1973) végeztük. Végeztünk szénforrás-hasznosítási kísérleteket is és az eredményeket a következőképpen minősítettük: + + = a glukóz-kontrollal azonos vagy annál nagyobb; pozitív hasznosítás + = a glukóz kontrolinál kisebb, a nem-szénkontrollnál kisebb; pozitív hasznosítás 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
