189512. lajstromszámú szabadalom • Eljárás makrolid antibiotikumok előállítására
1 . 189 512 2 majd szárítjuk, ami után 8,6 kg terméket kapunk. A termék 3 kg-ját aceton és víz elegyéből kikristályosítjuk, ezután 2,07 kg DMT szabad bázist kapunk. A DMT 132 °C hőmérsékleten lágyul, és 150 °C hőmérsékleten lassan olvad. A DMT elemanalízise a következő: szén: 65%; hidrogén: 8,5%; nitrogén: 2%; oxigén: 28%. A DMT tapasztalati képlete: C38HejN013, molekulasúlya: 742 (a tömegspektrometriás mérés szerint: 741). A DMT szabad bázis kloroformos oldatban vizsgált infravörös abszorpciós spektrumában maximumok figyelhetők meg. A maximumok az alábbi frekvencián láthatók (cm1): 3634 (kicsiny), 3559 (váll), 3423 (széles), 2955 (intenzív), 2907 (intenzív), 1710 (intenzív), 1676 (váll), 1588 (intenzív), 1447 (váll), 1396 (váll), 1359 (kicsiny), 1309 (kicsiny), 1178 (váll), 1156 (intenzív), 1111 (váll), 1072 (váll), 1048 (intenzív), 1013 (váll), 984 (váll), 926 (kicsiny), 898 (kicsiny), és 833 (kicsiny). A DMT ultraibolya abszorpciós spektrumában semleges etanolos oldatban vizsgálva a 283 nm-es hullámhosszon látunk elnyelési maximumot (s : 22,296 ; E! cm : 300,9). A DMT szabad bázis az alábbi specifikus forgatással rendelkezik: [ajf,5 : -53,5° (konc.: 1, metanolban). A DMT 66%-os, vizes dimetil-formamidos oldatában vizsgált elektrometrikus titrálás szerint 7,25 pKa-értékkel jellemezhető titrálható csoporttal rendelkezik. A DMT bázis vízben oldódik, oldódik továbbá a legtöbb poláris, szerves oldószerben, például acetonban, metanolban, etanolban, kloroformban, dimetil-formamidban és dimetil-szulfoxidban. A DMT savaddíciós sói vízben jobban oldódnak, mint maga a DMT bázis. A DMT papír- és vékonyréteg-kromatográfiával megkülönböztethető a tilozintól, és más, ismert tilozin-komponensektől. A XI. és XII. táblázatban összefoglaljuk a DMT és a különböző tilozinkomponensek Rf- és Rx-értékeit. A XII. táblázatban megadott R^-értékek a tilozin elmozdulásához viszonyított értékeket jelentik, a tilozin elmozdulását 1,0-nak véve. A vegyületek kimutatását Bacillus subtilis bioautográfiával végeztük. XI. Táblázat A DMV vékonyréteg-kromatográfiás adatai Vegyület R, -érlek Ab B C tilozin 0,53 0,53 0,67 DMT 0,45 0.52 0,61 dezmikozin 0,47 0,24 0,17 makrozin 0,23 0,49 0,60 relomicin 0,34 0,51 0,63 '= Merck, Darmstadt - szilikagél 60 b = oldószer-elegy : A : etil-acetát és dietil-amin 96 :4 arányú elegye B: aceton és etanol 2 : I arányú elegye C: kloroform és metanol 3 : I arányú elegye. XII. Táblázat A DMT papír-kromatográfiás vizsgálata Vegyület K Db E tilozin 1.0 1,0 DMT 0.76 0.95 dezmikozin 0,22 0,83 makrocin 0.43 0,87 relomicin 0,63 1,0 ,= Papír: Whatman No. 1, amit 0,75 mólos kálium-dihidrogénfoszfát pufferrel kezeltünk 4,0 pH-n, majd szárítottunk. b= Oldószer-elegy: D: vízzel telített etil-acetát E: vízzel telített n-butanol. A 3, 4, 6. és 7. példa célja tájékoztatás. 3. példa Az OMT izolálása A 2. példában megadottak szerint előállított DMT-t híg hidrogén-klorid-oldatban oldjuk (addig adunk sósavat a vízhez, míg az oldat pH-ja 1,8 lesz). A kapott oldatot 24 órán át szobahőmérsékleten hagyjuk állni, majd pH-ját nátrium-hidroxiddal 9,0-ra állítjuk be. A lúgos oldatot etil-acetáttal, diklór-metánnal vagy kloroformmal extraháljuk. Az extraktumot csökkentett nyomáson desztilláljuk, ami után megkapjuk az OMT-t. 4. példa Az OMT izolálása A 2. példában megadottak szerint előállított DMT 500 g-ját malomban porítjuk és 1,51 ionmentes vízhez adjuk. 20%-os kénsav szükség szerinti adagolásával 3,5 és 7,5 között tartjuk az oldat pH- ját. 30 perc múlva az összes DMT feloldódik. Ezután 1,4-re állítjuk be az oldat pH-ját, és 22 °C hőmérsékleten, 42 órán át hagyjuk állni. Ismert módon feldolgozva az oldatot, 366 g OMT-t kapunk, a termék azonosságát ismert mintával összehasonlítva vékonyréteg-kromatográfiával bizonyítjuk. Az ismert mintát a 3 459 853 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás szerint állítjuk elő. 5. példa A dihidro-DMT előállítása A 2. példában megadottak szerint előállított. DMT 50 mg-ját 25 ml 40%-os, vizes izopropil-alkoholban oldjuk. Ugyanakkor 10 ml 30%-os, vizes izopropil-alkoholban 20 mg nátrium-bórhidridet oldunk. 1 ml nátrium-bórhidrid-oldatot adunk a DMT-t tartalmazó oldathoz. 5 percen át keverjük a reakcióelegyet, pH-ját foszforsavval 7,5-re állítjuk be, majd az izopropil-alkohol eltávolítására csökkentett nyomáson desztilláljuk. Ezután vizet adunk a vizes sűrítményhez, a 25 ml térfogatú ol5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
