189512. lajstromszámú szabadalom • Eljárás makrolid antibiotikumok előállítására
1 189 512 2 A találmány tárgya eljárás az ismert terápiás használatú tilozinnal (lásd például Tetrahedron Letters, 2339, 1970) rokon makrolid antibiotikumok előállítására. A tilozin nagy értéke ellenére állandóan szükség van új antibiotikumok iránti kutatásra, mivel rezisztens törzsek jelenhetnek meg. Ezen felül a vegyületek szerkezetének módosítása megváltoztathatja az érzékeny mikroorganizmusok spektrumát. Sajnálatos módon a tilozinnal rokon makrolidok szerkezetének kémiai módosítása különösen nehéz, így például a J. Org. Chem., 44, 2050-2952, 1979., cikkben jelzik a tilozin molekuláról való micinozilglükozid kötés hasításának nehézségeit. Az ezen a területen dolgozó kutatók túlnyomó többségben oly módon kutatnak újszerű szerkezetű vegyületek után, hogy új, a természetben előforduló, vagy mesterségesen előállitott új mikroorganizmusokat keresnek, abban a reményben, hogy tenyésztésük során hasonló szerkezetű vegyületek bioszintetizálódnak. Úgy találtuk, hogy a tilozinhoz hasonló vegyületeket, de a tilozinban lévő micinozil-cukorrészt nem tartalmazó vegyületeket állíthatunk elő bizonyos Streptomyces fradiae törzsek süllyesztett, levegőztetett körülmények közötti fermentációjával. A találmány tárgya eljárás egy új, az (I) általános képleten bemutatott szerkezetű makrolid antibiotikumot tartalmazó állatorvosi készítmény előállítására, ahol az általános képletben Q —CH2OH vagy —CHO csoport. A találmány tárgya továbbá eljárás az (I) általános képletü vegyületek 1-5 szénatomos alkanoil-, fenil-(l—4 szénatomos)-alkanoil-, fenoxi-(l-4 szénatomos)-alkanoil- és halogén-fenil-(l-4 szénatomos)-alkanoil-észtereinek előállítására. Az (I) általános képletben ha a 3-as helyzetű csoport O-acetilcsoport, úgy a 4"-helyzetben nem lehet O-izovalerilcsoport. Bár a fenti szerkezetű képletben sztereokémiái konfigurációt nem jelöltünk, nyilvánvaló, hogy a vegyület sztereokémiái konfigurációja azonos a tilozinéval. A neutrális cukor mikaróz és az aminocukor mikaminóz. Abban az esetben, ha az általános képletben Q aldehidcsoport, úgy a vegyület új makrolid antibiotikum, nevezetesen a 23-demicinozil-tilozin, amit demicinozil-tilozinnak, vagy DMT-nek nevezünk, kényelmi szempontból. A vegyület a (II) általános képletben megadott szerkezetű. A DMT dihidro-származékát, azaz a 20-dihidro-23-demicinozil-tilozint dihidro-DMT-nek nevezzük, kényelmi szempontból. Ennek a vegyületnek a szerkezetét a (III) képleten mutatjuk be. A találmány szerinti vegyületek gátolják a melegvérű állatok számára patogén mikroorganizmusok növekedését. Részletesebben, ezek olyan baktériumellenes szerek, amelyek különösen aktívak Gram-pozitív mikroorganizmusokkal, és Mycoplasma fajokkal szemben. Használható acil-észter-származékok előállítására a DMT hidroxilcsoportjait és a dihidro-DMT- hidroxilcsoportjait észterezhetjük a 2'-, 4'-, 3"-, 23- és 3-hidroxilcsoportokon. Ezen felül a dihidro-DMT-t észterezhetjük a 20-hidroxilcsoporton is. A 2'-hidroxilcsoport észterezése a legkönnyebb. A találmány szerinti eljárást új Streptomyces fradiae törzzsel végezzük, e törzs száma NRRL 12 170. A találmány tárgya továbbá eljárás DMT vagy dihidro-DMT előállítására oly módon, hogy ezt a törzset süllyesztett, levegőztetett fermentációs körülmények között addig tenyésztjük, míg jelentős mennyiségű antibiotikum termelődik. A DMT-t vagy dihidro-DMT-t a lúgos fermentlé szürletéből extrahálhatjuk poláris, szerves oldószerekkel, majd tovább tisztíthatjuk extrakcióval, adszorpcióval és/ vagy kristályosítással. A DMT dihidro-származékát kémiai redukcióval vagy fermentációval állítjuk elő. Ha a dihidro- DMT-t kémiai redukcióval állítjuk elő, úgy ismert módon járunk el, például a DMT-t közelítőleg sztöchiometrikus mennyiségű kémiai redukálószerrel, például nátrium-bórhidriddel reagáltatjuk, például alkoholos oldószerrel készült reakcióelegyben. A dihidro-DMT előállítására eljárhatunk oly módon is, hogy a találmány szerinti S. fradiae NRRL 12 170 törzzsel szabályozott körülmények között végzünk fermentációt. Az acil-észter-származékok előállítására a DMT-t és dihidro-DMT-t észterezzük a 2'-, 4"-, 23- és 3-helyzetben oly módon, hogy ismert módon acilezőszerekkel reagáltatjuk. A dihidro-DMT-t a 20-helyzetben is észterezhetjük. A legkönnyebben a 2-hidroxilcsoport észtereződik. Acilezőszerként például anhidrideket, halogenideket (rendszerint bázissal, vagy más savelnyelővel együtt), és szerves savak aktív észtereit használjuk. Az acilezést szerves sav és egy dehidratálószer, például N,N'-diciklohexil-karbodiimid elegyével is végezhetjük. Az acilezés történhet enzimatikusan is, ahogy azt Okamoto és munkatársai írják a 4 092 473 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban. A keletkező acil-származékokat ismert módszerekkel különítjük el és tisztítjuk. A 2'-monoészter-származékokat az irodalomból ismert szelektív észterezéssel állíthatjuk elő, például oly módon, hogy az antibiotikumot sztöchiometrikus mennyiségű (vagy ennyi fölöslegben jelenlévő) acilezőszerrel reagáltatjuk, acilezőszerként például acil-anhidridet használunk; a reakciót szobahőmérsékleten, 1-24 órán át végezzük, míg az észtereződés gyakorlatilag teljessé válik. A 2'-monoésztert a reakcióelegyből ismert módszerekkel, például extrakcióval, kromatográfiával vagy kristályosítással különítjük el. Előnyös vegyületcsoportot képviselnek a gyógyszerészeti szempontból elfogadható észter-származékok. Más észter-származékokat is használhatunk intermedierként. A DMT, a dihidro-DMT és ezek acil-észter-származékai savaddíciós sókat képeznek. A DMT, dihidro-DMT és ezek acil-származékainak savaddíciós sói a találmány oltalmi köréhez tartoznak. Ezeket a sókat felhasználhatjuk például a DMT, dihidro-DMT és ezek acil-származékainak elkülönítésére, tisztítására és kristályosítására. Ahogy azt az előzőekben megjegyeztük, a DMT-t és dihidro-DMT-t oly módon állítjuk elő, hogy a Streptomyces fradiae egy törzsét tenyésztjük, olyan 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
