189251. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tumor nekrózis faktor stabilizálására
189 251 2 8. példa 1,0 x 10® E/mg fajlagos aktivitású, a referencia példa szerinti módon előállított nyúl TNF-ből 0,15 mól/1 NaCl tartalmú 0,1 mól/l-es foszfátpufferreí (pH 7,0) 100,1000,10 000 és 100 000 E/ml aktivitású oldatokat készítettünk. Az oldatok alikvotjaihoz stabilizálószerként HSA-t adtunk 1,0 mg/ml koncentrációban. Az így kapott oldatokat 4 °C-on 7 napig tároltuk, majd in vitro módszerrel végzett TNF aktivitás meghatározásnak vetettük alá őket. A maradék TNF aktivitást (%) az 1. példában ismertetett módon számítottuk. Kontrollként HSA nélküli TNF oldattal is elvégeztük a meghatározást. A kapott eredményeket a 7. táblázat tartalmazza. 7. táblázat HSA stabilizáló hatása TNF koncentrációja HSA koncentrációja, mg/ml E ml 0 (kontroll) 1,0 100 3 85 1000 5 98 10000 45 101 100000 48 99 (A számok a TNF maradék aktivitását fejezik ki %-ban.) összehasonlító példa Az 1. példában szereplővel megegyező TNF aktivitású oldat alikvotjaihoz különféle aminosavakat, fémsókat és kelátképző szereket - amelyek közismert stabilizátorai a közönséges fiziológiailag aktív anyagok oldatainak - adtunk különböző koncentrációban, a 8. táblázatban közöltek szerint. Az így kapott oldatokat 4 °C-on 7 napig tároltuk, majd in vitro módszerrel végzett TNF aktivitás meghatározásnak vetettük alá őket. A maradék TNF aktivitást (%) az 1. példában ismertetett módon számítottuk. A kapott eredményeket a 8. táblázat tartalmazza. 8. táblázat Különböző stabilizáló anyagok stabilizáló hatásuk alapján történő összehasonlítása Stabilizáló anyag Koncentráció Maradék TNF aktivitás (%) 4 "C-on 7 napig tárolva Nincs (kontroll) _ 26 HSA 1.0 (mg/ml) 98 PHG-1 1.0 (mg/ml) 97 HGG 1,0 (mg/ml) 97 SPS 1,0 (mg/mlj 90 Glicin 0,1 (mól/1) 30 L-Lyzin 0,1 (mól/1) 28 L-Arginin 0,1 (mól/1) 24 L-Glutamin sav 0,1 (mól/1 j 23 CaCl2 1 (nmól/1) 32 MgClj 1 (nmól/lj 32 EDTA 1 (nmól/1) 26 Megjegyzés: HSA, PHG-1, HGG és SPS az 1. példában szereplő anyagokkal megegyeznek. Kiadja az Országos Találmányi Hivatal A kiadásért felel: Himer Zoltán osztályvezető Szedte a Nyomdaipari Fényszedő Üzem (877839 09) 8 Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás tumor nekrózis faktor stabil vizes oldat 5 vagy stabil por formában történő előállítására, azzal jellemezve, hogy tumor nekrózis faktorból 102—10® TNF-aktivitás-egység/ml-es 5-10 pH-ra pufferolt vizes oldatot készítünk, az oldathoz annak 1 ml-ére számítva 10 pg és 5 mg közötti meny-10 nyiségű albumint vagy zselatint adunk, majd kívánt esetben az így kapott oldatot liofilizáljuk. (Elsőbbsége: 1982. 04. ,07.) 2. Eljárás tumor nekrózis faktor stabil vizes oldat vagy stabil por formában történő előállítására, az. zal jellemezve, hogy tumor nekrózis faktorból 102—109 TNF-aktivitás-egység/ml-es 5-10 pH-ra pufferolt vizes oldatot készítünk, az oldathoz annak 1 ml-ére számítva 10 pg és 5 mg közötti menynyiségű globulint, protamint vagy protaminsót 9n adunk, majd kívánt esetben az így kapott oldatot liofilizáljuk. (Elsőbbsége: 1982. 07. 27.) 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy stabilizálószerként albumint használunk. (Elsőbbsége: 1982. 04. 07.) 25 4. A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezö ve, hogy albuminként humán szérum albumint használunk. (Elsőbbsége: 1982. 04. 07.) 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy stabilizálószerként zselatint használunk. 3Q (Elsőbbsége: 1982. 04. 07.) 6. Az 5. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy zselatinként részben hidrolizált, vízben oldódó zselatint használunk. (Elsőbbsége: 1982. 04. 07.) 35 7. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezö ve, hogy stabilizálószerként globulint használunk. (Elsőbbsége: 1982. 07. 27.) 8. A 7. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy globulinként humán gamma globulint ... vagy annak valamilyen származékát használjuk. 4U (Elsőbbsége: 1982. 07. 27.) 9. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy stabilizálószerként protamint vagy valamilyen protaminsót használunk. (Elsőbbsége: 1982. 07. 27.) 45 10. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a stabilizálószert 100 gg és 5 mg közötti mennyiségben adjuk a tumor nekrózis faktor 102-10Q egység/ml aktivitású vizes oldatához, annak egy milliliterére számítva. (Elsőbbsége: 1982. 50 04. 07.) 2 oldal rajz 55 60 88-0178 — Dabasi Nyomda, Budapest — Da bas Felelős vezető: Bálint Csaba igazgató I
