189251. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tumor nekrózis faktor stabilizálására
189 251 2 Module NM-3 készülékkel (a gyártó Asahi Chemi- A TNF aktivitást 24 óra elteltével a korábbiakban cal Industry Co. Ltd.. Japán, cég védjegye az ultra- ismertetett kritérium alapján határoztuk meg. szűrő készülékre). Az igy töményített oldat 0,5 ml- A kapott eredményeket az 1. táblázat tartalmazza, ét injektáltuk 5-5 tumoros egér farokvénájába. ' _ /. táNizat HSA. BSA, PHG-I. HGG é» SPS mbilizitó Imi«« Körülmények (táró Kontroll ás vagy fizikai kezdés előtt) 4*C-on tárolva (oldat) Fagyasztásolvasztás 25 *C*©n tárolva liofilizált készítmény A/ uktivitás vizsgálati in vivo in vitro in vivo in vitro in vitro in vivo módszere Stabilizáló Koncert ránapok napok Ismétlés napok napok anyag ció mg/ml 2 7 30 7 1 3 7 7 Kontroll (stabilizáló 100 4 + + 4. + + I 52 26 4 + 3.-2 30 8 40 + 4.-1 anyag nélkül) 0.1 100 4 + +4. + + 1 102 95 90 + + + 3. + +2 90 82 95 + + + 3, 4 42 HSA 1.0 100 + + + 4. + 41 100 98 92 4 4 44. + 1 100 94 102 4 4 +4, + +I BSA 1.0 100 + 4+ 4. 4 + 1 99 98 93 4 4 44. + 1 102 96 96 4 + +3, + +2 0.1 100 + 4+ 4. 4 41 96 94 88 + + +3. 4 +2 95 85 97 4 4 +4. + + 1 PHG-1 1.0 100 4 4+ 4. + +I 103 97 91 4 4 +4. + + 1 101 93 100 + 4+5 0.1 100 + + +4, + + I 94 90 87 + + +5, + 2 »* •80 93 4 + +3, 4 +2 HGG 1.0 100 + 4+ 4. 4 4| 102 97 90 + + +3. + +2 100 90 98 + + + 3, 4+2 0.1 100 + 4+4. + +1 95 90 87 + + +3. + +2 93 80 90 + + +3, + +2 SPS 1.0 100 + 4+ 4. 4 + 1 101 96 90 4 4 +4. + 1 100 92 97 4 4 +4, 4 41 A/ „in vitro" jelű oszlopokban szereplő számok az előbbiekben definiált maradék aktivitást jelentik. A/ „in \ivo" jelű oszlopokban szereplő értékek az egerek számát jelölik. A szimbólumok + +, stb.) jelentését korábban megadtuk. HSA: Sigma Chemical Co., USA terméke BSA: Armour Pharmacentical Co.. USA terméke PHG-1: Nippi Co., Ltd.. Japán terméke (Nagy polimerizációs fokú zselatin) HGG: Nutritional Biochemical* Corp., USA terméke SPS. Sigma Chemical Co., USA terméke. 2. példa Az 1. példában szereplővel megegyező aktivitású TNF oldat alikvotjaihoz külön-külön, különböző koncentrációban stabilizálószereket adtunk (HSA, PHG-1, HGG, illetve SPS - azonosak az 1. példában szereplő fehérjekészítményekkel). Az így kapott oldatokat 7 napig 4 *C-on tároltuk, majd TNF aktivitásukat az in vitro módszerrel meghatároztuk. A maradék aktivitás számítását az 1. példa szerinti módon végeztük. A kapott eredmények az 1-4. ábrákon láthatók. 3. példa 1,0 x io6 E/mg fajlagos aktivitású, a referencia példa szerinti módon előállított TNF-ből 0,15 mól/1 NaCI tartalmú 0,1 mól/l-es foszfátpufferrel (pH 7,0) 1000 E/ml aktivitású TNF oldatot készítettünk. Az igy kapott oldat alikvotjaihoz két különböző fajta - a különböző albuminok, globulinők, protaminok és zselatinok közül választott - stabilizálószert együttesen adtunk hozzá különböző koncentrációkban, a 2. táblázatban szereplő módon. Valamennyi így kapott oldatot 4 *C-on 7 napig tároltuk, majd in vitro TNF meghatározásnak vetettük alá őket. A maradék TNF aktivitást (%) az 1. példa szerinti módon számítottuk. A kapott eredményeket a 2. táblázat tartalmazza. 30 35 40 2. táblázat A különböző stabilizáló anyagok hatása Stabilizáló anyag (koncentráció, mg/ml) Maradék aktivitás {"/„) 4 *C-on. 7 napig tárolva Nincs (kontroll) 5 BSA (0,5)+HSA (0,05) 96 HSA (0,01)+PHG-1 (0,05) 90 HPS (0,1) +PHG-1 (0,05) 95 BGG (1.0)+CEA (1,0) 93 HGG (0,1 ) +SPS (0.1) 94 Megjegyzés: BSA, HSA, PHG-1, HGG és SPS megegyeznek az 45 1. példában használt anyagokkal. HPS: Sigma Chemical Co. terméke BGG: Sigma Chemical Co. terméke CEA: Nutritional Biochemicals Corp. terméke. 50 4. példa A 3. példában szereplővel megegyező TNF aktivitású oldat alikvotjaihoz stabilizálószerként kü- 55 lönbözö albuminokat adtunk 1,0 mg/ml koncentrációban. Az így kapott oldatokat 4 *C-on 7 napig tároltuk, majd in vitro TNF aktivitás meghatározásnak vetettük alá őket. A maradék aktivitást (%) az 1. példa szerinti módon számítottuk. 60 A kapott eredményeket a 3. táblázat tartalmazza. 6
