189222. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, fertőző bronchitis elleni vakcina előállítására
1 189 222 2 IX. Példa Vakcinálási kísérletek a baromfiudvarban A. A vírus szaporítása és a vakcina készítése Az élő vakcina készítése a nem hemagglutináló H 120 és D 207 vírus törzsekből és a hemagglutináló D 274 vírus törzsből a VII. példa A. része szerint történik. B. Vakcinálás Fehér leghoom és barna tyúkok csapatait vakcináljuk egy napos korukban H 120 vakcinával. 10 hetes korukban a fehér leghoom tyúkokat és a barna tyúkokat vakcináljuk D 207, illetve D 274 vakcinákkal. A dózis 4,5 log EID50 madaranként. Az átlagos csoportszám 15 000 madár, és a vakcinát sprayvel adjuk be (háti szóróval). C. Vérminta-gyűjtés A D 207 és D 274 vakcinákkal történő vakcinálás napján csapatonként 24 vérmintát veszünk szerológiai vizsgálatra és ezt 4 héttel a vakcinálás után megismételjük. D. Az immunizálás ellenőrzése A semlegesítési indexet (NI) használjuk a védelem mértékének kifejezésére. Ha az NI átlaga több, mint 4 log a megfelelő szerotípus ellen, akkor ezt hatásos vakcinálásnak tekintjük. 10 10. táblázat A csapatok száma (átlagméret: 15 000 madár) Vakcinatörzs Vakcináit A vakcinálás napján pozitív* A vakcinálás utáni 4. héten pozitív* A választ adó csapatok százalékos növekedése D 207 (HA-) 10 4 6 40-60% D 274 (HA + ) 20 4 18 20-90% * Pozitív: az átlagos NI > 4 log a D 207 szerotípus ellen A 10. Táblázat megmutatja, hogy azoknak a csapatoknak a százaléka, amelyek védettséget jelentő semlegesítő válasszal reagálnak, szignifikánsan nagyobb a D 274 csoportban a D 207 vakcináit csoporttal összehasonlítva. X. Példa A Hl antitest titer kifejlődése és eloszlása a vakcinálási kísérletek folyamán a baromfiudvarban szerotípus ellen - két vakcinálás után nem hemagglutináló törzsekkel - gyengébb volt: a csapatok 30 66%-ának Hl titere 7-nél kisebb volt. A válasz a D 212 szerotípus (vakcinálás nélkül) ellen az elvárásnak megfelelően még alacsonyabb volt: a csapatok 82%-ának Hl titere 7-nél- kisebb volt. A II. ábrán látható hosszmenti ábrázolásból 35 szintén az a következtetés vonható le, hogy a D 274 törzzsel történt egyszeri vakcinálás után a HI titer következetesen magasabb, mint amelyet a hagyományos Massachussets vakcinákkal történő kétszeres vakcinálás kivált. A tojó- és tenyészcsapatoknak hemagglutináló D 274 törzsből készült vakcinával történt vakcinálása utáni szerológiai válaszát figyeljük meg. XI. Példa 137, átlagban 15 000 madarat tartalmazó csapa- Csirke (RBC) eritrociták hemagglutinálása tot vakcinálunk 10-12 hetes korukban egy dózis élő D 274 vakcinával (D 207 szerotípusú), háti szóró- 45 Az új FBV törzsek spontán hemagglutináló aktival történő beadással. Massachussets típusú vakcinálási végzünk ugyanezekben a, csapatokban 1 napos korban (H 120) és kb. 15 hetes korban (H 52). Minden csapatot megvizsgálunk Hl antitestre a megfelelő szerotípusok 50 (Massachussets D 207 és D 212) ellen 18-20 hetes korban. A HI titer eloszlási sémáját - a három FB szerotípus ellen a D 274 vakcinával történt vakcinálás után - az I. ábra mutatja. A 137 csapatból 16-ot 55 követünk 38 hetes korig és a Hl titert mérjük négyhetes intervallumokban. Az eredményeket a II. ábra szemlélteti, amely a 16 vakcináit csapat litereinek hosszméreti ábrázolása. A vakcinálás 1 napos korban H 120 törzzsel, 16 hetes korban H 52 törzs- 60 zsel (mindkettő Massachussets típusú) és 12 hetes korban D-274 törzzsel történt. A 137 csapatból 86% mutatott 7-nél nagyobb Hl titert, 63%- 8-nál nagyobb Hl titert és 25% 9-nél nagyobb Hl titert a D 207 szerotípus ellen. A válasz a Massachussets 65 vitását, amelyet megvizsgáltunk az V. és VI. példákban gyors lemez HA teszttel, megvizsgáljuk sokkal pontosabb módon lassú HA teszttel is mikrotitráló lemezeken, ha a spontán hemagglutinálás nem mutatkozott következetesen. , Mivel kívánatos a hemagglutináló és nemhemagglutináló törzseket megkülönböztetni lassú, kvantitatív HA teszttel mikrotitráló lemezeken, koncentrált és részben tisztított vírus szuszpenziókat alkalmazunk a HA aktivitás demonstrálására. A. A vírus szuszpenzió készítése A 10 napos embriót tartalmazó tojásokból allantoisz-folyadékot gyűjtünk 24-48 órával az inokulálás után. Az AAF-et centrifugálással tisztítjuk (1000 xg, 10 perc). 35 ml AAF vírus-tartalmát pellet formában nyerjük ki SW-28 rotort (Beckman) használva 30 000 xg-nél 60 percen át. Az így nyert pelleteket 1 ml, foszfáttal pufferolt sóoldattal felszuszpendáljuk. 8
