189207. lajstromszámú szabadalom • Eljárás foszfortart L-prolinn-származékok előállításásra
1 189 207 2 szer ismételjük. Végül a halványsárga maradékot vízzel odljuk, és 40 ml hidrogéncilusú AG50W-X2 gyantával töltött oszlopra öntjük, és először vízzel majd 5%-os piridines vízzel eluáljuk. A kívánt terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, és szárazra pároljuk. A szilárd maradék acetonítrillel való eldörzsölése után 0,97 g [(2-amino-etil)-hidroxi-foszfinilj-ecetsavat kapunk csontszínü kristályos anyagként, amelynek olvadáspontja 225 °C (bomlás). Rf = 0,09 (izopropanol : tömény ammóniumhidroxid oldat : víz = 7 : 2 : 1). d) {[2-(Benzoil-amino)-etíl]-hidroxi-foszfinil}ecetsav. 0,75 g (4,49 mmól) [(2-amino-etil)-hidroxi-foszfinil]-ecetsav 5 ml dioxán és 5 ml víz elegyével készített szuszpenzióját jeges fürdőben lehűtjük, és hozzáadunk 2,0 ml (14,5 mmól) trietil-amint. Tiszta oldatot kapunk. Az elegyhez ezután 5 perc alatt hozzácsepegtetünk 0,65 ml (5,6 mmól) benzoílkloridot. Az elegyet 0 °C-on 1 óra hosszáig keverjük, majd utána szárazra pároljuk. A maradékot 20 ml telített vizes nátrium-hidrogén-karbonát oldattal oldjuk, és etil-acetáttal mossuk. A vizes fázist tömény sósavoldattal pH 1-re savanyítjuk, és diklór-metánnal extraháljuk. A diklór-metános extraktumokat eldobjuk, és a vizes fázist kis térfogatra bepároljuk. A betöményített oldatot 30 ml acetát formájú AG1-X8 gyantával töltött oszlopra öntjük, és először vízzel, majd 5%-os vizes ecetsavoldattal végül 1 n sósavoldattal eluáljuk. A termék az 1 n sósavoldattal eluálódík. A kívánt terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, szárazra pároljuk, vízben oldjuk, és liofilizáljuk. A 0,9 g nyersterméket 2,54 cm (1 inch) átmérőjű 200 ml HP-20 töltetű oszlopon víz-acetonitril (0-+ 100%) lineáris gradienssel eluálva kromatografáljuk 5 ml/perc átfolyási sebességgel, és 5 ml-es frakciókat szedünk. A kívánt terméket tartalmazó frakciókat vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat után egyesítjük, bepároljuk, vízzel oldjuk, millipore szűrőn szűrjük, és liofilizáljuk. így 0,72 g {[2-(benzoil-amino)-etil]-hidroxí-foszfiníl}-ecetsavat kapunk fehér szilárd anyagként, amelynek olvadáspontja 54-57 °C. Rf = 0,42 (izopropanol : tömény ammóniumhidroxid oldat : víz= 7:2:1). e) l-[{[2-(Benzoil-amino)-etil]-hidroxi-foszfiníl}acetil]-L-prolin-benzil-észter. 0,6 g (2,21 mmól) {[2-[benzoil-amino)-etiljhidroxi-foszfinilj-ecetsav 20 ml vízmentes tetrahidrofurán és 10 ml vízmentes acetonítrillel készített oldatához szobahőmérsékleten argongáz alatt 0,4 g (2,47 mmól) N,N'-karbonil-diimidazolt adunk. Az elegyhez 1 óra keverés után 1,1 ml (7,95 mmól) trietil-amint és 0,65 g (2,69 mmól) L-prolin-benzilészter-hidrokloridot adunk, hagyjuk szobahőmérsékletre melegedni, és éjszakán át keverjük. A reakcióelegyet 50 ml etil-acetáttal és 50 ml 5%-os kálium-hidrogén-szulfát oldattal rázzuk össze. A vizes fázist 4 x 50 ml etil-acetáttal visszaextraháljuk. Az egyesített etil-acetátos extraktumokat alaposan mossuk 5%-os nátrium-hidrogén-foszfát oldattal (ph 4,5 puffer) és telített vizes nátrium klorid oldattal, nátrium szulfáton szárítjuk, és bepároljuk. A 0,82 g maradékot 20 mi telített nátrium-hidrogén-karbonát oldattal oldjuk, és 2 x 25 ml etilacetáttal mossuk. A vizes fázist tömény sósavoldattal pH 1-re savanyítjuk, szilárd nátrium-kloriddal telítjük, és 3 x 25 ml diklór-metánnal extraháljuk. Az egyesített extraktumokat nátrium-szulfáton szárítjuk, bepárlás után 0,7 g l-[{[2-(benzoilamíno)-etil]-hidroxi-foszlinil}-acetil]-L-prolin-benzil-észtert kapunk fehér habként. Rr= 0,28 (ecetsav : metanol : diklór-metán = = 1:1:8). Rr = 0,76 (izopropanol : tömény ammóniumhidroxid oldat : víz = 7 : 2 : 1). f) l-[{[2-(Benzoil-amino)-etil]-hidroxi-foszfinil}-acetil]-L-prolin-dilítiumsó. Az ej pontban előállított észterszármazékot 60 ml metanolban oldjuk, az oldathoz 0,3 g 10%-os palládiumosszén katalizátort adunk, és Parr-készülékben 3,5 bar (50 psi) nyomáson 2,5 óra hosszáig hidrogénezzük. Az elegyet Celíten át szűrjük, és szárazra pároljuk. A maradékot 3 ml 1 n lítíumhidroxid oldatban és 4 ml vízben oldjuk, és 40 ml lítium-ciklusú AG50W-X8 gyantával töltött oszlopon engedjük át vízzel eluálva. A kívánt terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, és liofilizáljuk. A nyers liofilizátumot 2,54 cm (1 inch) átmérőjű, 200 ml HP-20 gyantával töltött oszlopon kromatografáljuk 100% víz -> 100% acetonitril lineáris gradienssel 5 ml/perc átfolyási sebességgel eluálva; 5 ml-es frakciókat szedünk. A kívánt terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, bepároljuk, millipore szűrőn szűrjük, és liofilizáljuk. így l-[{[2-(ben- zoíl-amino)-etil]-hidroxi-foszfinil}-acetil]-L-prolin-dilítiumsót kapunk. 5. példa (±)-l-[{[2-(Benzoi!-amino)-3-fenil-propil]-hidroxi-foszfinil}-acetíl]-L-prolin-dilítiumsó. a) a-Benzil-akrilsav-etil-észter. 25 g (0,10 mól) benzil-malonsav-dietil-észter 65 ml etanollal készített oldatához 0 °C-on argongázatmoszférában 15 perc alatt hozzácsepegtetjük 5,6 g (1 ekvivalens) kálium-hidroxid 65 ml etanollal készített oldatát. Az elegyet 72 óra hosszáig 25 °C-on keverjük, utána az etanolt eldesztilláljuk, és a maradékot 10 ml tömény sósavoldattal megsavanyítjuk. A kapott fehér olajat etil-acetáttal extraháljuk, majd nátrium-klorid oldattal mossuk, magnézium-szulfáton szárítjuk, és bepároljuk. így 24 g átlátszó folyékony benzil-malonsav-etíl-észtert kapunk. A vékonyrétegkromatogram adatai: hexán : etilacetát (3 : 1); fő folt Rf = 0,1-nél. A 24 g (0,10 mól) benzil-malonsav-etil-észtert, 2,5 g (0,1 mól) paraformaldehidet, 18 ml piridint és 1,0 ml (0,1 ekvivalens) piperidint 1,5 óra hosszáig forraljuk visszafolyó hűtő alatt; gázfejlődés észlelhető. A reakcióelegyet dietil-éterrel hígítjuk, és utána vízzel, 1 n sósavoldattal, vízzel, nátrium-klorid oldattal mossuk, magnézium-szulfáton szárítjuk, és bepárolva 23 g maradékot kapunk. A maradék desztillálásával 13,5 g a-benzil-akrilsav-etil-észtert 5 10 15 2C 25 30 35 40 45 50 55 60 65 10
