189207. lajstromszámú szabadalom • Eljárás foszfortart L-prolinn-származékok előállításásra
1 189 207 2 számított: C% 42,90; H% 8,10; N% 6,25; P% 13,8, mért: C% 42,74; H% 8,11; N% 6,33; P% 13,5. e) 0,60 g (2,69 mmól) d) pontban előállított amino-disav 10 ml vízmentes acetonitrillel készített szuszpenzióját 2,6 ml (9,8 mmól) N,N-bisz(trimetil-szilil)-trifluor-acetamiddal elegyítjük, és szobahőmérsékleten argongáz alatt 1 óra hosszáig keverjük. A kapott tiszta oldathoz utána 0,34 ml (2,93 mmól) benzoil-kloridot adunk, és szobahőmérsékleten 2 óra hosszáig keverjük. Az elegyet utána szárazra pároljuk, a maradékot 10 ml acetonitril és 2 ml víz elegyében oldjuk, 10 percig keverjük, majd 5-6 g Celittel keverve megszárítjuk. Az anyagot tartalmazó Celitet zsugorított üvegszűrőn előbb 100 ml dietil-éterrel és utána tetrahidrofuránnal mossuk. A tetrahidrofurános oldat bepárlásával 0,85 g (97%) (S)-{[2-(benzoil-amino)-hexil]hidroxi-foszfinilj-ecetsavat kapunk fehér habként. A hab etil-acetát/dietil-éter elegyből való átkristályosításával 0,82 g (93%) tiszta disavat kapunk fehér kristályos anyagként, amelynek olvadáspontja 131-132 °C. [a]D = +2,1° (c=l,í2; metanol). -Rf = 0,55 (izopropanol : tömény ammóniumhidroxid oldat : víz = 7 : 2 : 1). Az elemanalízis eredményei a C15H22NO5P öszszegképletre: számított: C% 55,04; H% 6,77; N% 4,28; P% 9,46, mért: C% 54,74; H% 6,91; N% 4,30; P% 9,2. f) (S)-l -[{[2-(benzoil-amino)-hexil]-hidroxi-foszfinil}-acetil]-L-prolin-benzil-észter. 0,60 g (1,82 mmól) e) pontban előállított disav 15,0 ml vízmentes tetrahidrofuránnal készített oldatát lehűtjük 0 °C-ra (jeges fürdő) argongáz alatt, és hozzáadunk 0,33 g (2,04 mmól) N,N'-karbonildiimidazolt. Az elegyhez 1 óra múlva 0,88 ml (6,36 mmól) trietil-amint és 0,46 g (1,90 mmól) L-prolin-benzil-észter-hidrokloridot adunk, hagyjuk szobahőmérsékletre felmelegedni, és éjszakán át keverjük. Utána a reakcióelegyet etil-acetáttal és 5%-os kálium-hidrogén-szulfát oldattál rázzuk öszsze. A szerves fázist alaposan mossuk 5%-os kálium-hidrogén-szulfát oldattal, 5%-os nátrium-hidrogén-foszfát oldattal (pH 4,5 puffer) és telített vizes nátrium-klorid oldattal, nátrium-szulfáton szárítjuk, és bepároljuk. így 0,85 g (90%) (S)-l-[{[2- (benzoil-amino)-hexil]-hidroxi-foszfinií}-acetil]-L- prolin-benzil-észtert kapunk fehér habként. Rf = 0,19 (ecetsav : metanol : diklórmetán =1:1 :20); Rf = 0,74 (izopropanol : tömény ammóniumhidroxid oldat : víz = 7 : 2 :1). g) (S)-1 -[{[2-(Benzoil-amino)-hexil]-hidroxifoszfinil}-acetil]-L-prolin-dilítiumsó. 0,84 g (1,63 mmól) f) pont szerint előállított benzil-észter 40 ml vízmentes metanollal készített oldatához 0,35 g 10%-os palládiumosszén katalizátort adunk, és Parr-készülékben 3,5 bar (50 psi) nyomáson 1 óra hosszáig hidrogénezzük. Az elegyet Celiten átszűrjük, és szárazra pároljuk. A nyers disavat 4,1 ml (4,1 mmól) 1 n lítium-hidroxid oldattal oldjuk, és 2,54 cm (1 inch) átmérőjű, 200 ml töltettérfogatú HP-20 oszlopon kromatografáljuk víz-acetonitril (0 -> 100%) gradienssel 5 ml/perc átfolyási sebességgel eluálva és 5 ml-es frakciókat gyűjtve. A kívánt frakciókat egyesítjük, bepároljuk, vízzel oldjuk, millipore szűrőn szűrjük, és liofilizáljuk. így 0,65 g (91%) cím szerinti vegyületet kapunk. Rf = 0,53 (izopropanol : tömény ammóniumhidroxid oldat : víz = 7 : 2 : 1). [a]D = -40,7° (c= 1,10; metanol). Elektroforézis: pH 6,5; 2000 V; 30 perc; egyetlen folt +2,5 cm-nél; láthatóvá tétel karbonil-reagenssel. Az elemanalízis adatai a C2oH27N206PLí2 • 1,4 H20 összegképletre: számított: C% 52,08; H% 6,50; N% 6,08; P% 6,71, mért: C% 52,08; H% 6,38; N% 6,15; P% 6,7. Olvadáspont: 230-234 °C (bomlás). 16. példa: (S)-1 -[{[2-(Benzoil-amino)-3-fenil-propil]-pivaloiloxi-metoxi)-foszfinil}-acetil-j-L-prolin-monolítiumsó. 0,83 g (1,51 mmól) 1. példa g) ponja szerint előállított foszfinsav, 1,5 ml (10,8 mmól) trietil-amin és 1,35 ml (9,37 mmól) (klór-metil)-pivalát 10,0 ml vízmentes dimetil-formamiddal készített oldatát szobahőmérsékleten argongáz alatt keverjük. Mintegy 20 óra hosszáig tartó keverés után további 0,9 ml (6,24 mmól) (klór-metil)-pivalátot és 1,0 ml (7,23 mmól) trietil-amint adunk a reakcióelegyhez, és folytatjuk a keverést, összesen 50 óra hosszáig tartó keverés után az elegyet etil-acetáttal és 5%-os kálium-hidrogén-szulfát oldattal rázzuk össze. ; A szerves fázist háromszor alaposan mossuk vízzel, j 5%-os kálium-hidrogén-szulfát oldattal, telített vi' zes nátrium-hidrogén-karbonát oldattal, és telített vizes nátrium-klorid oldattal, nátrium-szulfáton ; szárítjuk, és bepároljuk. A maradékot 60 g szilikagél LPS-l-en etil-acetát : diklór metán (1 : 1) elegy;gyel eluálva kromatografáljuk. így 0,76 g (76%) (pivaloiloxi-metil)-észtert - (S)-l-[{[(2-benzoil-ami; no)-3-fenil-propil]-(pivaloiloxi-metoxi)-foszfinil}-acetil]-L-prolin-benzil-észter - kapunk fehér habként. A vékonyrétegkromatogram adatai : etil-acetát: : diklór-metán (2 : 1); két folt (1 : 1, izomerek a : foszfornál); Rf = 0,17 és 0,23. ! 0,73 g (1,10 mmól) fenti diészter 50 ml metanollal készített oldatához 0,35 g 10%-os paládiumosszén katalizátort adunk, és Parr-készülékben 3,5 bar (50 psi) kezdeti nyomáson 1 óra hosszáig hidrogénezzük. Az elegyet Celiten át szűrjük, és a metanolos oldatot szárazra pároljuk. A maradékot 10 ml vízmentes diklór-metánnal oldjuk, hozzáadunk 0,2 ml (1,45 mmól) trietil-amint, és szárazra pároljuk. A kapott trietil-ammóniumsót vízzel oldj juk, 30 ml lítiumciklusú AG50W-X8 gyantával tölj tött oszlopra öntjük, és vízzel eluáljuk. Az ultraibolya fényben végzett vizsgálat szerint a kívánt anyagot tartalmazó frakciókat egyesítjük, millipore szűrőn szűrjük, és liofilizáljuk. így 0,56 g (88%) cím szerinti vegyületet kapunk csaknem fehér szilárd anyagként. 5 10 15 20 25 30 35 1 ! j :40 1 i4S 50 ! I j 55 60 65 17
