189135. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 9-hidroxi-3-oxo-4,17(20) pregnadién-20-karbonsav előállítására
„ .vSEäSE#. 1 . .189 135 2 * * Az (I) képletű vegyületet értékes kortikoidok intermediereként használjuk. így pl. a 79104 372.2. sz. európai szabadalmi leírásban ismertetett módon hidrokortizon-acetáttá alakíthatjuk. A találmányt'az alábbi példákkal világítjuk meg közelebbről az oltalmi kör korlátozása nélkül. 1. példa. Nyers szitoszterin fermentálása Literenként 8,0 g Ucont (szintetikus habzásgát-. ló, polipripilén-glikol; gyártó: UNION CARBIDE), 5,0 g Cerelozt (nyers glükóz; gyártó: CORN PRODUCTS), 3,0 g NH4Cl-t, 3,0 g CaC03-t, 3,0 g Na3(citrát).2 H2Ó-t, 2,0 g Tween 80-at, 1,0 g szójalisztet, 0,5 g KH2P04-t, 0,5 g karbamidot, 30,0 g szitoszterint és csapvizet tartalmazó biotranszformációs közeg (melynek pH-ját 7-re állítjuk be) 100ml-ét 10 ml M. fortuitum NRRL B-12433 oltókultúrával - melyet literenként 8,0 g Peptonos húslevest, 5,0 g, glicerint, 1,0 g élesztő kivonatot, 1,0 g Tween 80-at és desztillált vizet tartalmazó tápközegen (melynek pH-ját 7-re állítjuk be), 28*C-on tenyésztünk - inokulálunk. A kultúrát ezután 28 °C-on 336 órán át forgó rázógépen inkubáljuk. Az inkubálás után extraháljuk, és a terméket a 3. példában ismertetett módon különítjük el. 2. példa Az 1. példában ismertetett módon járunk el és tiszta vagy nyers szterinekből vagy ezek kombinációjából, pl. szitoszterinből, koleszterinből, stigmaszterinből és/vagy kampeszterinből indulunk ki. 3. példa. Az (I) képletű vegyület elkülönítése M. fortuitum NRRL B-12433 törzzsel végzett fermentáció fermentlevéből Szitoszterin M. fortuitum NRRL B-12433 törzszsel végzett fermentálásával kapott fermentlé 1200 ml-ét megsavanyítjuk és kétszer azonos térfogatú metilén-kloriddal extraháljuk. így 29,2 g, illetve 8,9 g nyers extraktumot kaptunk. Az első extraktumot metilén-kloridban ismét feloldjuk és-telített nátrium-hidrogénkarbonát oldattal mossuk. Az egyesített vizes fázisokat 4 n sósavval megsavanyítjuk, metilén-kloriddal ismét extraháljuk, majd vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk és szüljük. Az oldószert lepároljuk, és a kapott szilárd, sárga színű maradékot metilén-kloriddal eldörzsöljük. A halvány sárga port metilénklorid/metanol oldószerelegyből átkristályosítjuk. A három egymást követő átkristályosítás során az 5 (I) képletű vegyületet 90, 35, ill. 10%-os koncentrációban tartalmazó kristálykeveréket nyerünk. Az egyes frakciók súlya 3,8 g, 2, 1 g, ill. 2,8 g. Az első generációt metilén-klorid/metanol oldószerelegyből háromszor átkristályosítjuk, és így 10 1,8 g (I) képletű vegyületet kapunk, melynek olvadáspontja 240-242 *C. [a]D = 40,7* (metanol). Tömegspektrum: (m/e) = 358 (molekulaion, CmHjqOJ. 15 Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás az (I) képletű 9-hidroxi-3-oxo- 4,17(20)-pregnadién-20-karbonsav előállítására az-20 zal jellemezve, hogy egy Mycobacterium-fortuitum mutánst, előnyösen a Mycobacterium fortuitum NRRL B—8119 törzs mutánsát, még előnyösebben a Mycobacterium fortuitum NRRL-B-12433 törzset vizes közegben, aerob körülmények között egy 25 vagy több szterin jelenlétében tenyésztjük, és a ki-. vánt terméket elkülönítjük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a Mycobacterium fortuitum NRRL-B-8119 törzs mutánsát vizes közegben 30 aerob körülmények között egy vagy több szterin jelenlétében tenyésztjük, és a kívánt terméket elkülönítjük. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a Mycobacterium fortuitum 35 NRRL-B-12433 törzset vizes közegben egy vagy több szterin jelenlétében tenyésztjük, és a kívánt terméket elkülönítjük. 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a Mycobacterium fortui-40 tum NRRL-8119 törzs mutánsát vizes közegben aerob körülmények között két vagy több szterin keverékének jelenlétében tenyésztjük, és a kívánt terméket elkülönítjük. 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljá-45 rás azzal jellemezve, hogy a Mycobacterium NRRL-B-12433 törzset vizes közegben aerob körülmények között két vagy több szterin keverékének jelenlétében tenyésztjük, és a kívánt terméket elkülönítjük. 50 6. Az 1-5, igénypontok bármelyike szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy szterinként szitoszterint, koleszterint, sztigmaszterint vagy kampeszterint használunk. 1 oldal rajz Kiadja az Országos Találmányi Hivatal A kiadásért felel: Himer Zoltán osztályvezető Szedte a Nyomdaipari Fényszedö Üzem (877837/09) 89-0137 — Dabasi Nyomda, Budapest — Dabas Felelős vezető: Bálint Csaba igazgató 3
