189133. lajstromszámú szabadalom • Speciális réteglap és/vagy réteglaprendszer túlnyomásos sokrétegkromatográfiához
1 189 133 2 hordozólapú (pl. műanyag, alumínium vagy üveg) túlnyomásos vagy hagyományos réteglapból. Az egyszerre futtatható réteglapok számának elvileg nincs felső határa. A túlnyomásos technika jelenlegi fejlettsége mellett - készüléktől függően - 2-8 lap egyidejű futtatása lehetséges. A lapok mérete és a futtatás módja tetszőleges lehet (egy- és kétirányú, cirkuláris stb.), egy eluenssel egyszerre különböző szorbenst tartalmazó lapok is futtathatók, ha az egyszerre futtatott réteglapoknak az eluens szempontjából közel azonos az ellenállásuk, és geometriailag egybevágók. Az egyes réteglapoknál az eluens szétterítéséről többféle módon gondoskodhatunk:- az adott szorbensrétegbe vájunk egy vagy több eluensvezető csatornát- a párnaként funkcionáló hordozólapot képezünk ki (egy vagy több eluensvezető csatornát vagy élt), ilyenkor a legfelső szorbens oldószervezetéséről betétlap gondoskodik- magát a perforációt alakítjuk ki a futtatási irányra merőlegesen, hosszanti rés formájában- minden egyes réteget perforált, terelőcsatornával vagy éllel ellátott fedőlappal borítunk. A gyakorlatban úgy is eljárhatunk, hogy á perforált és a szorbensmentes oldalon oldószervezető csatornákkal ellátott lapokat a készülékben egymásra helyezzük. A legfelső réteget terelőcsatornás fedőlappal fedjük le, a legalsó rétegnek pedig perforáció nélküli (hagyományos) túlnyomásos réteglap kerül (4. ábra). Eljárhatunk úgy is, hogy megfelelő számú perforált és terelőcsatornával ellátott fedőlapot célszerűen füzet illetve tasak formában összekapcsolunk (5. ábra). Ha a réteglapoknak pontos helyet képezünk ki,'evvel megkönnyíthető a pontos egymásrahelyezésük is. A találmány szerinti megvalósítás során az oldószerelegy réteglapról (1) való elvezetését a bevezetéshez (4,5) hasonlóan perforációval (14) ès terelőcsatornával ( 15) oldhatjuk meg (6. ábra). A 2 az impregnált szélt és 3 a mintafelviteli helyeket jelöli. Találmányunk gyakorlati megvalósitásához réteg alapanyagként szervetlen (szilikagél, alumínium-oxid, talkum stb.) és szerves (cellulóz, poliamid stb.) szorbenst, valamint inaktív szorbensként kovaföldet, Cellitet stb. használunk. Jelen találmányunk alkalmazásával tehát egyszerre több, tetszőleges méretű réteglapon végezhetünk elválasztást, igy a készülék teljesítménye sokszorosára nő, s ezáltal elsősorban a hatékony sorozatvizsgálatok nélkülözhetetlen eszközévé válik. A kettő vagy több réteglapot egyszerre használó technika a túlnyomásos rétegkromatográfiát az eddiginél magasabb szintre emeli. A túlnyomásos sokréteg-kromatográfiának nevezhető technika mint a síkelrendezésű folyadékkromatográfia legújabb változata eredményesen használható pl. növénynemesítésben (pl. búza, kukorica nemesítése), klinikai laboratóriumokban, ipari ellenőrző laboratóriumokban stb. Találmányunkat a következő kiviteli példákkal szemléltetjük: PÉLDÁK 1. példa 20 x 20 cm-es tereftalát alapú műanyaglapra 5 pm átlagos szemcseméretű szilikagélt 0,20 cm vastagságban közepes molekulatömegü poliakrilamid ragasztóval (1,8% szárazanyagtartalommal) rétegzünk úgy, hogy két egymással szemben levő oldalának szélein 5 mm szélességben szabadon marad, s erre utólag műanyagdiszperzió segítségével víz- és oldószerálló műanyagfilmet alakítunk ki. A réteglapot középen 160mm szélességben 2 mm keresztmetszetű réssel perforáljuk. Négy darab teljesen hasonló módon készült perforált réteglapra a perforált réstől 15-15 mm-re, két oldalt egymástól 10-10 mm távolságra 15-15 azonos mennyiségű CAMAG II színanyag tesztet viszünk fel. - A mintafelviteli helyek megszáradása után a lapokat pontosan egymásra illesztjük, legalulra pedig nem perforált, de impregnált szélű és mintákkal ellátott lapot teszünk, s az így összeálló rendszert túlnyomásos rétegkromatográfiás készülékbe helyezzük, s kifejlesztésre metilén-kloridot használunk. Az oldószer áramlási sebesség: 185 cm3/h, futási idő: 4,5 min. A lapon az adott körülmények között azonos fronttávolságot és azonos Rr értékeket és diffúziót észlelünk. 2. példa 20 x 40 cm-es 0,20 mm vastag alumíniumlapra 5 pm átlagos szemcseméretű szilikagélt 0,25 mm vastagságban polivinilacetát ragasztóval (2% szárazanyágtartalommal) rétegzünk úgy, hogy két egymással szemben levő oldalának szélein 3 mm szélességben szabadon marad, s erre utólag műanyagdiszperzió segítségével víz- és oldószerálló műanyagfilmet alakítunk ki. A réteglapot középen 182 mm szélességben 0,8 mm keresztmetszetű réssel perforáljuk. Két darab, teljesen hasonló módon készült perforált réteglapra a perforált réstől 15-15 mm-re, két oldalt egymástól 10-10 mm távolságra 15-15-ször huszonegy fehérje-aminosavat tartalmazó elegyet viszünk fel 1-1 pg aminosav/folt mennyiségben. A mintafelviteli helyek megszáradása után a lapokat pontosan egymásra illesztjük, legalulra pedig nem perforált, de impregnált szélű és mintákkal ugyancsak ellátott lapot teszünk, s az így összeálló rendszert túlnyomásos rétegkromatográfiás készülékbe helyezzük, s kifejlesztésre nbutanol-jégecet-viz 4:1:1 arányú elegyét használjuk. Futási idő: 65 min. A futtatás után a szétszedett kromatogram-lapokat megszárítjuk. Az egyik lapot 0,2%-os ninhidrin reagenssel (0,2 g ninhidrin + 80 cm3 metanol + 20 cm3 ecetsav + 0,05 g CuS04.5 H20) fújjuk be, s 5 percig 100 °C-on melegítjük. A kapott színes kromatogramot kromatogramspektrométerrel értékeljük. A 2x15 mintánál aminosavanként ± 1,5% eltérést észlelünk. A másik megszáradt lapot Sakaguchi-reagenssel fújjuk be, s így az arginint specifikusan tudjuk ki5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 4
