189090. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új hidropiridoindol származékok előállítására

1

189 090

2

Patkányokat (Sprague-Dawlcy CD hímek, 250- 300 g, Charles River Laboratories, Wilmingtor, Mass.) dekapitálunk és azonnal kimetsszük az agyat a corpus striatum kinyerésére. Ezt 40-szeres térfogatú jéghideg 50 mM-os pH 7,7 trisz-pufferben 5 (trisz-hidroximetil-aminometán.HCl) homogenizáljuk. (Alkalmazott készülék: Brinkman Polytron PT-10). A homogenizátumot kétszer centrifugáljuk

50,000 g-n, 10 percen át 0-4 °C-on; a két centrifugálás között a közti termékként kapott pelleteket 10 azonos térfogatú trisz-pufferben a Polytronban újra homogenizáljuk. A végső termékként kapott pelleteket óvatosan szuszpendáljuk 90-szeres térfogatú hideg 50 mM-os trisz.HCl pufferben - pH

7,6 -, amely 120 mM-os NaCl-ra, 5 mM-os KCl-ra, 15 2 mM-os CaCI2-ra, 1 mM-os MgCI2-ra, 10 giM-os pargilinre és 0,1 % aszkorbinsavat tartalmaz. A szövetszuszpenziót 5 percre 37 °C-os vízfürdőbe helyezzük és felhasználásig jéghidegen tartjuk. Az inkubációs keverék 0,02 ml inhibitor-oldatot vagy 20 hordozót, 1,0 ml szövetpreparátumot és 0,10 ml 3H-spiroperidolt (New England Nuclear, 23,6 Ci/ mmól) tartalmaz, amelynek töménysége olyan, hogy 0,5 nM végkoncenírációt biztosítson. A kémcsöveket sorozatban inkubáljuk 10 percen át 37 °C-on 25 hármas csoportokban, majd mindegyik inkubált

kémcső tartalmából 0,9 ml-t vákuumban, Whatman GF/B szűrőn leszűrünk. 5 ml hideg trisz-HCl puffernd - pH 7,7 — való kétszeri mosás után mindegyik szűrőt egy-egy, 10 ml Aquasol-2-t (New England Nuclear) tartalmazó szcintillációs csőbe helyezzük és ezeket a csöveket vortex kezelésnek vetjük alá. A mintákat egy éjjelen át szobahőmérsékleten tartjuk, mielőtt folyadék-szcintillációs számlálóban meghatároznánk a radioaktivitást. A kötődést megkötött 3H-spiroperidol, fmól/mg fehérje alakban számítjuk ki. A kontrollokat (hordozó vagy 10~7 M

1-butaklamol), a vakpróbákat (10‘7 M d-butaklamoi) és az inhibitor oldatokat (négy koncentrációban) három párhuzamosban vizsgáljuk. Féllogaritmikus papíron kiszámítjuk azt a koncentrációt, amely a kötődést 50 %-kal csökkenti (IC50). Az

I. táblázatban szereplő IC50 értékek két vagy három kísérlet átlagát jelentik. Az oldhatatlan anyagokat etauolban oldjuk; 1-2 % etanol a végső inkubációs elegyben. Mint ezt az I. táblázat mutatja, ez a belső módszer olyan eredményeket szolgáltat, amelyek sze'int a találmány szerinti vegyületek kiváló neuroíepdkus aktivitást mutatnak.

A találmányt a következő példákkal illusztráljuk. Magától értetődik azonban, hogy a találmány nem korlátozódik a példák szerinti konkrét részletekre.

I. táblázat

lH-pirido[4,3-b]indolok neuroleptikus aktivitása

Vegyületszerkezet09

R3

n

Amfetamin-aktivitás (b> közelítő EDS0, mg/kg i. p.

lh 5h 24h

(0)

(I)

4

0.018

0,01-0,32

0,056

4(+)

0,04

0,01

0,11

6

0,32-1

k. 0,32

0,32-1

(O)

(III)

4

0,057

0,08

0,057

6

k . 0,1

k. 0,1

0,1-0,32

(O)

(IV)

4

n. 1

0,32-1,0

kb. 0,32

(O)

(VIII)

4

0,18

0,11

0,36

(Q)

(IX)

4

1-3,2

k. 3,2

3,2-10

(Q)

(VII)

4

3,6

1,1

0,57

(O)

(V)

2

0,57

0,57

n. 32

3

0,11

0,05

n. 0,32

6

0,18

0,033

n. 0,32

(Q)

(VI)

4

—

5,7

—

kb. 1,78(<9

kb. 1,781*9

3,2-5,6<d>

(Q)

(X)

4

r. 10

1-3,2

n. 10

(Q)

(XI)

2

0,18

0,06

0,57

4

1 -3,2

0,32-1,0

0,32-1,0

2(+)

0,04

0,02

0,23

(Q)

(XII)

4

3,2-10

kb. 3,2

3,2-10

(W)-NHCOCH3

6

0,32-1,0

0,32-1,0

n. 10

(W)

(I)

4

kb. 1

kb. 3,2

n. 10

(W)-NHCOOC2H5

6

1-3,2

kb. 3,2

n. 10

klórpromazin

5,3

8,5

n. 32

5