188954. lajstromszámú szabadalom • Eljárás B12 koenzim anaerob fermentálására alkalmas új inokulum előállítására
1 188 954 2 32 °C-os ivóvízzel 10 1-re egészítjük ki, ismét homogenizáljuk, majd az üvegfermentort gumilappal lefedjük és 32-34 °C-os termosztátba helyezzük. A továbbiakban homogenizálás után naponta 50 ml mintát veszünk és 35 ml metanolt adunk a fermentorba, majd újabb 200 ml mintát veszünk, a fermentort gumilappal ismét lezáijuk és azonos hőmérsékleten, hét napon át folytatjuk az anaerob fermentálást. Ez a második hétnapos fermentálás után kapott fermentlé az ún. 2. generáció. A 2. generációból elvesszük a homogenizált fermentlé 10 tf%-át és helyébe azonos térfogatú tápközeget adunk. A tápközeg összetétele az alábbi: 1.0 1 30-32 °C-os ivóvízbe az alábbi tápanyagokat adagoljuk: 35 ml metanolt, 10 ml hőkezelt kukoricalekvár oldatot (hidrolizátumot), 3.0 g ammónium-hidrogén-karbonátot, 0,1 g magnézium-kloridot, 0,05 g kobalt-kloridot, 0,03 g 5,6-dimetil-benzimidazolt és 0,02 g nátrium-biszulfitot. A tápközeg hozzáadása után a fermentlevet alaposan összekeverjük, a fermentort gumilappal lezárjuk és újabb 24 óráig 32-34 °C-on fermentálunk. A 24 óra letelte után az inokulum előállítás befejeződött. A továbbiakban a fermentlé B12 koenzimet termelő üzemelésre alkalmas. 3. példa Ebben a példában azt bizonyítjuk, hogy az inokulum laboratóriumi méreten túlmenően kisüzemi léptékben is előállítható. 2.0 m3 hasznos térfogatú kísérleti fermentor-' ba 10001 30—32 °C-ra melegített ivóvizet szivatytyúzunk, amelyhez az 1. példa szerint előkészített tápanyagokat adagoljuk: 7.0 1 metanolt, 20.0 1 hőkezelt kukoricalekvár oldatot (hidrolizátumot), 6.0 kg ammónium-hidrogén-karbonátot, 0,2 kg magnézium-kloridot, 0,01 kg kobalt-kloridot, 0,006 kg 5,6-dimetil-benzimidazolt és 0,06 kg nátrium-biszulfitot. A fenti tápanyagokat tartalmazó tápközeghez alapos összekeverés után 400 1 az 1. példa szerinti, anaerob szennyvíziszapot adunk hozzá, 30— 32 °C-ra melegített ivóvízzel 2 m3-re egészítjük ki, homogenizálás után lezárjuk a fermentor munkanyílását és 30—32 °C-on megkezdjük az anaerob fermentálást. A továbbiakban naponként 20 perc keverés után a fermentléből mintát veszünk, majd beadagolunk 7,0 1 metanolt, 20 percig keverjük, újabb mintát veszünk és a fermentálást 24 órán keresz6. tül tovább folytatjuk. A metanol beadagolása előtt vett mintából a fermentlé metanol-koncentrációját és pH-értékét határozzuk meg, a metanol betáplálás utániból a biogáztermelés sebességét mérjük. A fermentáció hetedik napján a tenyészetet (1. generáció) friss táptalajra oltjuk át, egyúttal ötszörösére növeljük a fermentálás méretét. 10 m3 hasznos térfogatú fermentorba 6 m3 30- 32 °C-ra melegített ivóvizet szivattyúzunk, ehhez adagoljuk a fentiek szerint előkészített tápanyagokat: 35.0 1 metanolt, 100.0 1 hőkezelt kukoricalekvár oldatot (hidrolizátumot), 30.0 kg ammónium-hidrogén-karbonátot, 1.0 kg magnézium-kloridot, 0,05 kg kobalt-kloridot, 0,03 kg 5,6-dimetil-benzimidazolt és 0,30 kg nátrium-biszulfitot. A tápközeghez alapos összekeverés után a 2 m3 hétnapos fermentlevet szivattyúzunk, majd 30—32 °C-ra melegített ivóvízzel 10 m3-re egészítjük ki, összekeverjük és 30-32 °C-on megkezdjük az anaerob fermentálást. . A továbbiakban naponta 30 percig keveijük a fermentlevet, mintát veszünk, majd 35 1 metanolt adagolunk be, újabb 30 percig keveijük, ismét mintát veszünk. A naponta vett mintákból a fent leírt méréseket rendszeresen végezzük. A 2. generációból 40 perc keverés után elveszszük a fermentlé 10 tf%-át (1 m3), és helyébe azonos térfogatú tápközeget adunk. A 0,5 m3 30-32 °C-ra felmelegített ivóvízben az alábbi tápanyagokat oldjuk fel: 35.0 1 metanolt, 10.0 1 hőkezelt kukoricalekvár oldatot (hidrolizátumot), 3.0 kg ammónium-hidrogén-karbonátot, 0,1 kg magnézium-kloridot, 0,05 kg kobalt-kloridot, 0,03 kg 5,6-dimetil-benzimidazolt és 0,02 kg nátrium-biszulfitot. Ezt betápláljuk a fermentorba, majd 30-32 °C-ra melegített ivóvízzel 10 m3-re egészítjük ki, 30 percig keveijük, majd a keverést megszüntetjük és újabb 24 óráig anaerob módon fermentálunk. A 24 óra letelte után az inokulum előállítása befejeződött. A fermentlé jellemző értékei: pH=5,4-5,8; gáztermelés 0,5—0,8 1/liter fermentlé/nap; hatóanyag-tartalma 8,3 mg/1. A továbbiakban a fermentlé B12 koenzimet termelő fermentációs üzemelésre alkalmas. A tápanyagok előkészítését és a kukoricalekvár minőségi ellenőrzését az 1. példában leírt módon végezzük. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
