188954. lajstromszámú szabadalom • Eljárás B12 koenzim anaerob fermentálására alkalmas új inokulum előállítására
1 188 954 2 rium, így az átoltáshoz használt iszap baktériumai tényleges túlsúlyban vannak. A kevés szerves anyagot és azok között is jellemzően metanolt tartalmazó tápközeg ezen bevitt baktériumok közül a metanolbontó, metánt termelő mikroorganizmusoknak kedvez. Továbbmenőleg eljárásunk nagy biztonságot is nyújt az anaerob, mezofil, metántermelő, szeptikus fermentációnál, mert bármikor gyorsan, kis költséggel újra a kívánt mikropopulációhoz juthatunk és folytathatjuk a B12 koenzim előállítását. A találmány eljárás új, anaerob, mezofil, metántermelő, vegyes mikropopulációt tartalmazó, B12 koenzim (kobamid koenzim) szakaszos, félfolyamatos vagy folyamatos fermentálására alkalmas inokulum előállítására szeptikus úton, azzal jellemezve, hogy — egy téfogat 0,3—0,8 tf%, előnyösen 0,4-0,7 tf% metanolt, 1,0—4.0 tf% hőkezelt kukoricalekvár oldatot, vagy hőkezelt kukoricamoslékot, 0,25—0,7 v% ammónium-hidrogén-karbonátot, 0,01—0,03 v% magnézium-kloridot, 0,0001-0,002 v% kobalt-kloridot, 0,0002—0,001 v% 5,6-dimetil-benzimidazolt és 0,003-0,008 v% nátrium-biszulfitot tartalmazó indító tápközeget 0,1—0,8 térfogat vízzel, majd 0,15—0,5 térfogat anaerob, rothasztott szennyvíziszappal elegyítünk, kívánt esetben az adagolás sorrendjét felcseréljük, ;, — az elegyet 4-9 napig anaerob, mezofil, szeptikus körülmények között napi 0,3—0,5 tf% metanol adagolása mellett fermentáljuk, — az így kapott fermentlevet (1. generáció), vagy annak egy részét, négy-hatszoros térfogatú az indító tápközeggel azonos összetételű tápközeghez adagoljuk és a fermentálást azonos körülmények között 5,0—6,0, előnyösen 5,0—5,5 pH- érték csökkenésig tovább folytatjuk, — a fermentlé (2. generáció) egy részét, előnyösen 5-15 tf%-át, elvesszük és helyébe azonos térfogatú 2,5—8,0 tf% metanolt, 0,5—4,0 tf% hőkezelt kukoricalekvár oldatot vagy hőkezelt kukoricamoslékot, 0,25—0,7 v% ammónium-hidrogén-karbonátot, 0,01—0,03 v% magnézium-kloridot, 0,08-0,005 v% kobalt-kloridot és 0,002—0,008 v% 5,6-dimetil-benzimidazolt, 0,001—0,005 v% nátrium-biszulfitot tartalmazó tápközeget adunk és — kívánt esetben a fermentálást egy-két napig folytatjuk, — ily módon anaerob, mezofil, metántermelő, vegyes mikropopulációt tartalmazó, B12 koenzim termelésére alkalmas inokulumot kapunk. A találmányunk szerinti eljárásban a tápközeg elkészítéséhez eddig alkalmazott, kereskedelmi forgalomban levő kukoricalekvár helyett hőkezelt kukoricalekvár oldatot (hidrolizátum) vagy hőkezelt kukoricamoslékot használunk. A hőkezelt kukoricalekvár oldatot a kereskedelmi forgalomban levő kukoricalekvárból vízzel történő hígítással, majd ezt követő forralással, végül az oldat lehűtésével készítjük. A hőkezelt kukoricalekvár oldat kukoricalekvár: víz tömegaránya 0,5-1,0:1,0-0,5. A „kukoricamoslék” a kukorica alapú keményítő-, szesz- és izo-cukor gyártásánál képződő hulladékanyag, amely a kukorica áztatóvizének és a szeszgyártás üstmaradékának együttes bepárlása során keletkezik. (A Szabadegyházi Szeszipari Vállalat terméke, 1.: 1. példa.) A hőkezelés előtt a kukoricalekvárt illetve a kukoricamoslékot mikrobiológialag minősítjük és csak a megfelelő minőségű kiindulási anyagból készítünk tápközeget. A mikrobiológiai minősítés lényegében fermentációs művelet, amelyet részletesen az 1. példánkban ismertetünk. Amennyiben a minősítés 4. napján a biogáz terme lés 0,3—0,6 1/1 fermentlé/nap, a kiindulási tápanyag az új inokulum előállítás követelményeinek megfelel. Az új inokulum előállításához szükséges tápközeget önmagában ismert módon állítjuk elő (1. példa). A találmányunk szerinti tápközeg az.alábbiakban különbözik az eddig alkalmazottaktól:- kevés szerves anyagot és azok között is jellemzően metanolt tartalmaz,- a kereskedelmi forgalomban levő kukoricalekvár helyett annak hőkezelt oldatát (hidrolizátumát) és/vagy hőkezelt, „kukoricamoslékot” alkalmazzuk,- az új összetételű tápközeg eredményeként az inokulum előállítás során feldúsuló vegyes mikropopuláció összetétele és termelési tulajdonsága megváltozik, továbbmenőleg az eddig szükséges 6—7 átoltással szemben egy átoltásra és néhány napos (1—2 napos) fermentációra van szükség. Találmányunk szerint egy térfogat új tápközeghez, amely 0,3-0,8 tf% metanolt, 1,0—4,0 tf% hőkezelt kukoricalekvár oldatot (hirdolizátumot) és/vagy hőkezelt kukoricamoslékot, 0,25—0,7 v% ammónium-hidrogén-karbonátot, 0,01—0,03 v% magnézium-kloridot, 0,0001-0,002 v% kobalt-kloridot, 0,0002-0,001 v% 5,6-dimetil-benzimidazolt és 0,003—0,008 v% nátrium-biszulfitot tartalmaz, 0,1-0,8 térfogat vizet és 0,15—0,5 térfogat rothasztott szennyvíziszapot adunk, amelyet előnyösen a városi szennyvíziszap anaerob litórothasztójából frissen vesszük, kívánt esetben az adagolás sorrendjét felcseréljük. Alapos homogenizálás után 30—32 °C-on megindítjuk a fer3 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
