188861. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új lipofil muranil- peptidek előállítására
1 188 861 2 valamint a citotoxikus effektorsejtek tartoznak) hatásait is közvetítik. így például az említett vegyületek 1 — 20 pg/ml koncentrációtartományban a kortizonrezisztens thymussejtek reaktivitását jelentős mértékben (10-szeres nagyságig) képesek növelni hasonló szerkezetű besugárzott stimuláló limfocitákkal szemben. (Vizsgáiat az „A” jelzésű vegyülettel). A fent említett hatások valószínűleg közvetve jönnek létre azáltal, hogy ilyen lipofil muramilpeptidek makrofágokat aktiválnak, amelyek a maguk részéről T- és B-limfociták reaktivitását segítik. Valójában kimutatható, hogy az említett vegyületek már kis koncentrációkban (0,5—10 pg/ml) nagy mennyiségű „colony stimulating activity” (CSA) felszabadítanak egérmakrofágokból (7 nap alatt 105 egér-csontvelősejtből származó 150 — 200 kolónia indukciója, 24 óra alatt az anyaggal inkubált, makrofág-tenyészetből származó 20 % fennmaradó rész hozzáadása után, míg a kezeletlen nakrofág-tenyészetek maradékának a hozzáadásakor 0 — 5 kolónia indukciója következik be). A CSA egy biológiai közvetítő, amely csontvelő-törzssejteknek makrofágokra és polimorf-maggal rendelkező leukocitákra való szétválasztásához szükséges. Ezzel az említett vegyüle■;ek olyan sejtek megnövekedett pótlását segítik, amelyek a nem-fajlagos ellenállás és a fajlagos (limfocitaközvetítő) immunreakciók indukciója, növelése és expressziója szempontjából központi jelentőségűek. Az új vegyületek immunhatásfokozó képességét in vivo a következő módon bizonyítjuk: egy találmány szerinti eljárással előállított murapilpeptid polipeptid-származékát 3-9 órán belül addig fecskendezzük be egereknek, ameddig a CSA-koncentráció a szérumban magas szintre nem emelkedik (120 kolónia 105 egér-csontvelősejtben, kloroformmal extrahált szérum hozzáadása után [5 % végkoncentráció], míg a kezeletlen állatoknál 0-5 kolónia). Ennek megfelelően ugyanezeknek a vegyületeknek in vivo beadásánál az egerek antitestképző képessége jelentős mértékben megnövekszik. (Vizsgálat az „A” jelzésű vegyülettel.) Az (I) általános képletű vegyületek immunhatás fokozó tulajdonságait tumormodelleken is bemutathatjuk, így például Ehrlich Ascites tumoron egérnél. 106 syngen Ehrlich Ascites tumorsejt intraperitoneális befecskendezése Balb/c egereknél átlagosan 18 nap alatt az állatok pusztulásához vezet. Amennyiben az egereknek intraperitoneálisan olyan 107 (1. csoport), 10® (2. csoport) és 105 (3. csoport) Ascites tumorsejtet fecskendezünk be, amelyhez (I) általános képletű új vegyületeket adtunk (109 Ascites tumorsejtet 40 mg vizsgálandó anyag 20 ml foszfáttal pufferolt fiziológiás konyhasóoldattal (PBS) készített oldatában szuszpendálunk és kétszer PBS-el mosunk; a sejtek ennél a kezelésnél a vizsgálandó vegyületet a sejthárlyájukba kebelezik be), így 18 nap alatt nem jön létre tumornövekedés. A 19. napon az állatokba 10e natív Ehrlich Ascites tumorsejtet viszünk be intraperitoneálisan. Ekkor a következő hatások figyelhetők meg: 1. csoport: 8-10 állat a 80. napot túléli 2. csoport: 6—10 állat a 80. napot túléli 3. csoport: az állatok elpusztulnak 18 nap után, ahogy a kontroli-állatok (Vizsgálatok az „A” jelzésű vegyülettel). A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek ezenkívül csak kissé toxikusak: 5-szöri intraperitoneális alkalmazást is tünetmentesen viseltek ei láthatóan az egerek 100 mg/kg/nap dózis esetén öt egymást követő napon történő beadás esetén. Mivel az immunhatás fokozásához szükséges adagok nagyon kicsik, azért az új vegyületek terápiás tartománya nagyon széles. Kísérleteink során az „A”, „B”, „C”, „D” és „E” jelzésű vegyületeket vizsgáltuk. A találmány szerinti eljárással előállított új vegyületek a sejtimmunitást és különösen a humorális immunitást jelentős mértékben képesek növelni, mégpedig mind az antigénnel magával (adjuvánshatás szükebb értelemben) elegyben, mind pedig időben és helyileg az antigéninjekciótól elkülönített bevitelnél (szisztémiás immunhatásnövelés). A találmány szerinti eljárással előállított új vegyületek adjuvánsokként oltóanyagokkal együtt az oltás sikerességének a javítására használhatók, ezenkívül arra is alkalmazhatók, hogy a humorális antitestek és/vagy a sejtimmunitás által a közvetített fertőzés elleni védelmet javítsák baktérium, vírusos vagy parazita kórokozókkal szemben. Végül a találmány szerinti eljárással előállított új vegyületek alkalmasak különböző antigénekkel, mint adjuvánsokkal elegyben terápiás és diagnosztikai antiszérumok kísérleti és ipari előállításánál, valamint immunológiailag aktivált limfocitaszaporodás indukálásánál sejtátviteli eljárásokra. Ezen túlmenően az új vegyületek egyidejű antigénbevitel nélkül is használhatók arra, hogy a már küszöbérték alá kerülő immunreakciókat segítsék embernél és állatnál egyaránt. A vegyületek eszerint különösen alkalmasak a test védekezőképességének fokozására, például krónikus és akut fertőzéseknél vagy szelektív (antigén-fajlagos) immunológiás károsodásoknál, valamint veleszületett, de örökölt, általános (azaz nem antigén-fajlagos) immunológiai hibaállapotoknál is, amelyek öregkorban, súlyos megbetegedések első időszakában és mindenek előtt ionizáló sugarakkal vagy immunszupresszív hatású hormonokkal való terápia után fellépnek. Az említett anyagok így előnyösen antibiotikumokkal, kemoterápiás szerekkel vagy más gyógyítóeljárásokkal kombinációban is alkalmazhatók annak érdekében, hogy immunológiai károsodások ellen hassanak. Végül a leírt anyagok fértőzéses megbetegedések általános megelőzésére is alkalmasak embernél és állatnál egyaránt. A találmány elsősorban azokra az (I) általános képletű vegyületek, valamint fém- vagy ammóniumsói előállítási ejjárására vonatkozik, amelyek képletében X karbonilcsoport, Rx valamely 1-3 szénatomos alkilcsoport vagy fenilcsoport, R3 hidrogénatom vagy metilcsoport, R5 1-3 szénatomos 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
