188847. lajstromszámú szabadalom • Eljárás liofilizett abszorbeált kombinált vakcinák előállítására
1 2. táblázat 188 847 2 Alumínium-hidroxid A tetanusz-antitoxin-titer átlaga az egyszeri immunizálást követő (mg/adag) 14. napon 28. napon 42. napon 0,625 0,4 0,8 1,2 10 1,25 0,8 1,9 2,6 2,5 0,8 5,0 6,0 5,0 1,5 8,0 8,0 10,0 0,5 4,0 3,0 20,0 0,2 0,5 1,0 15 A kapott eredményeket matematikailag kiértékelve az optimális alumínium-hidroxid-mennyiség sorban 3,1 mg, 3,06 mg és 3,44 mg-nak adódott. 20 5 KE tetanusz-toxoidot és 5 Lf (limes fiocculans) diftéria-toxoidot tartalmazó modellvakcina esetén a következő eredményeket kaptuk: 3. táblázat ' 25 , . A diftéria-antitoxin-titer átlaga az 3Q Aluminium-hid- egySzerj immunizálást követő (mg/adag) 14. napon 28. napon 42. napon 0,625 0,03 0,3 0,4 1,25 0,12 0,8 0,8 2,5 0,2 1,6 1,6 5,0 0,2 1,8 2,0 10,0 0,04 0,3 0,6 A kapott eredményeket matematikailag kiértékelve az optimális alumínium-hidroxid-mennyiség sorban 2,72 mg, 2,78 mg, illetve 3,0 mg-nak adó- 45 dott. Hasonló kísérleteket végeztünk alumínium-foszfát hordozóra vonatkozóan is. Kísérleteink eredményeinek összegzéseképpen azt mondhatjuk, hogy a két hordozó mennyisége előnyösen 1,75 és 3,5 mg között van 3 ml-es adagonként. A találmány értelmében úgy járunk el, hogy az egyes koncentrált antigéneket külön-külön oldatban adszorbeáljuk oldhatatlan hordozóra, az egyes antigénekre jellemző optimális pH-értéknél. így a tetanusz-toxoidot 3 körüli, a diftéria-toxoidot 4 körüli és a pertusszisz-, illetve a tífusz-antigént 5,8-6 körüli pH-értéknél. Eljárhatunk azonban úgy is, hogy az antigének egyesített oldatában végezzük az adszorbeáltatást 3 és 6 közötti pH értéknél. Ismeretes, hogy az alumínium-foszfát-, illetve alumínium-hidroxid-gél fizikai-kémiai sajátságai a liofiíezés során megváltoznak. A részecskenagyság jelentősen megnő, az adszorpciós kapacitás csökken. Megfelelő vivőanyaggal azonban a gél fizikaikémiai sajátságai megóvhatok. A kalmas vivőanyagok pl. a fehérjék, polipeptídek, poliszacharidok és egyéb szintetikus védőkolloidok. Az alkalmazott vivőanyaggal szemben legfontosabb követelmény az, hogy kémiailag, immunológiailag, farmakológiailag inert legyen, továbbá ne legyen toxikus. Maga a megfelelő módon koncentrált adszorbeált antigén is - fehérjetermészeténél fogva - jelentős védőhatást fejt ki. Kísérleteink során azt tapasztaltuk, hogy megfelelő az antigén-koncentráció, ha 3 ml össztérfogatban 10 adag vakcina van oldvt. Ezen kívül azonban még további vivőanyagra is szükség van. A két hatás együttesen már megfelelő védelmet nyújt a liofiíezés során. Kísérleteink oen erre legalkalmasabbnak a 40 000-es mólsúlyú dextránt, illetve a dextrán és poliszacharidok kombinációját találtuk. A hordozóanyag fizikai-kémiai tulajdonságait a liofilezést követő rekonstituálás utáni ülepedési sebességgel jól lehet jellemezni. A következő táblázatban az antigén-fehérje és a dextrán liofiíezés alatt együt esen az alumínium-foszfát hordozó fizikaikémiai tulajdonságaira kifejtett hatásara vonatkozó kísérleteink eredményeit foglaljuk össze. 4. táblázat Fehérje n t ' Ülepedés (mm) mennyisége e;^ran Liofiíezés előtt Liofiíezés után (mg/ml) 15 perc 30 perc 5 perc 30 perc 0 0 3 14 Homokszerü 0,2 0 3 14 homokszerü 0,8 0 3 15 homokszerű 3,2 0 4 13 homokszerű 13,0 0 4 10 többfázisú 50,0 0 1 8 50 0 1 4 15 homokszerü 0,2 1 3 14 többfázisú ülepedés, 0,4 1 3 15 homokszerü 0,8 1 3 15 aggregálódással 3
