188681. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mikarozil-tilakton előállítására
1 188 681 2 • 4 1 ily módon előállított második fokozatú tenyészettel 40 1 steril főfermentációs táptalajt oltunk, aminek az összetétele az alábbi: összetevő Mennyiség (%) 5 halliszt kukoricaliszt kukoricadara kalcium-karbonát nátrium-klorid diammónium-hidrogén-foszfát répa melasz szójabab olaj (nyers) lecitin víz 0,92 1,57 0,92 0,21 0,10 0,04 2,10 3,15 10 0,09 15 90,90 nyú elegyének 900 ml-ével. Dy módon elkülönül a tilakton és a mikarozil-tilakton. Az eluálás közben 150 ml térfogatú frakciókat gyűjtünk. Először a tilakton eluálódik (14-19. frakciók), majd ezt követően a 22-26. frakciókban a mikarozil-tilakton. A hatóanyagot tartalmazó frakciókat egyesítjük és csökkentett nyomáson desztilláljuk, a desztillációs maradékot heptánból kikristályosítjuk, ily módon 160 mg tilaktont és 120 mg mikarozil-tilaktont kapunk. A mikarozil-tilakton fehér színű anyag, ami heptánból hexánból vagy etil-acetát és hexán elegyéből kristályosodik, 182-184 °C hőmérsékleten olvad. Közelítő elemanalízise a következő: szén: 67%; hidrogén: 9%; oxigén : 24%. Tapasztalati képlete: C^HsoOg ; molekulasúlya pedig: A táptalaj pH-ját 50%-os nátrium-hidroxid-oldattal 538. 7,2-re állítjuk be. A mikarozil-tilakton kloroformos oldatban vizsgált A beoltott főfermentációs táptalajt 68 1 térfogatú fér- 20 infravörös abszorpciós spektrumát a mellékletben adjuk mentorban tenyésztjük, 5 napon át, 28 °C hőmérsékle- meg. A következő hullámhosszakon (cm-1 ) látszik elnyeten. A tenyészeten steril levegőt vezetünk át, mégpedig lési maximum: 3640 (közepes), 2941 és 2907. (dublett, olyan mennyiségben, hogy a tenyészetben oldott oxigén erős), 2421 (igen kicsiny), 1712 (erős), 1678 (közepes), szintje 30% és 50% között legyen, a hagyományos keve- 1623 (kicsi), 1590 (erős), 1456 (közepes), 1404 (kicsi), rőt percenként 300-as fordulatszámmal működtetjük. 25 1374 (kicsi), 1359 (váll), 1314 (kicsi), 1284 (kicsi), 1263 (igen kicsiny), 1229 (kicsi), 1178 (erős), 1157 2. példa (közepes), 1134 (igen kicsiny), 1109 (kicsi), 1078 (igen A mikarozil-tilakton és a tilakton izolálása kicsiny), 1050 (közepes), 1025 (igen kicsiny), 1000 900 ml, az 1. példa A) pontjában megadottak szerint (erős), 984 (erős), 962 (közepes), 920 (igen kicsiny), előállított tenyészetet 900 ml petroléterrel extrahálunk. 3Q 911 (igen kicsiny), 887 (kicsi), 867 (kicsi), 848 (váll), Az extraktumot levegőáram alatt töményítjük, desztil- 836 (kicsi) és 799 (kicsi)/ lációs maradékként olajos terméket kapunk. Ezt kevés A mikarozil-tilakton semleges etanolos oldatban vizseitl-acetátban (15 ml) oldjuk. Ezután 15—20 ml hexánt gált ultraibolya abszorpciós spektrumában 282 nm-es adunk az oldathoz. Az etil-acetátot lassan hagyjuk elpá- . hullámhosszon (E1^ = 568) látszik elnyelési maximum, rologni, ekkor kristályosodás indul meg. A kristályokat 35 A mikarozil-tilakton specifikus forgatása: elkülönítve 450 mg kristályos anyagként tilakton és mi- [0)5 : —46,4° (konc.: 1, metanol), karozil-tilakton keverékét kapjuk. .A mikarozil-tilakton vízben gyakorlatilag oldhatatlan, További terméket kapunk oly módon, hogy a hátra- oldódik azonban szerves oldószerekben, mint például maradt teljes tenyészethez azonos térfogatban metanolt acetonban, metanolban, etanolban, dimetil-formamidadunk, a kapott oldatot szűrjük, a szűrletet pedig meri- 4q bah, kloroformban, dietil-éterben, petroléterben, benzollén-kloriddal extraháljuk. ban és dimctil-szulfoxidban. 400 mg keveréket elkülönítjük oly módon, hogy benzolban oldjuk. A benzolos oldatot szilikagélből (Woelm) Szabadalmi igénypont készült oszlopon kromatografáljuk, az oszlopot benzollal egyensúlyozzuk ki. Az eluálódást szilikagél vékonyréteg- 45 Eljárás az (I) képle tű mikarozil -tilakton előállítására, -kromatográfiával ellenőrizzük, oldószer-elegyként ben- azzal jellemezve, hogy a Streptomyces fradiae NRRL zol és etil-acetát 3:2 arányú elegyét használjuk. Áz anyag 12201 törzset vagy annak mutánsát vagy variánsát sülyelőhívását tömény kénsavval végezzük. Pgz. oszlopot elő- lyesztett, levegőztetett fermentációs körülmények köször a lipidek eltávolítására benzollal eluáljuk, ezután zött felhasználható szénforrást, nitrogénforrást és szerbenzol és etil-acetát 9:1 arányú elegyének 1 literével, 50 vetlen sókat tartalmazó táptalajon tenyésztjük és a kaezt követően benzol és,etil-acetát 6:1 arányú elegyének pott mikarczil-tilaktont. önmagában ismert módszerck-1400 ml-ével, végül pedig benzol és etil-acetát 3:1 ará- kel izoláljuk és adott esetben tisztítjuk. 2 rajz, 2 ábra Kiadja az Uis/ágos Találmányi Hivatal A kiadásért fold: Hinter Zoltán osztályvezető Megjelenik a Mííaaki Könyvkiadó gondozásában KULTÚRPROF1L - FOTON nyomda K 88071
