188667. lajstromszámú szabadalom • Eljárás depolimerizált, szulfatált heparin-poliszacharid elegyek előállítására
1 188 667 2 M2d = +41° antikoaguláns aktivitás (Codex): 157 NE/mg. A 4. és 9-11. példákban kiindulási anyagként alkalmazott benzetónium-heparinát (a heparin semleges benzetóniumsója) szarvasmarhabélből származó heparinból volt előállítva, és jellemző tulajdonságai az alábbiak voltak: átlagos molekulasúly: 11 400 dalion fajlagos forgatóképesség vizes oldatban, 20 °C hőmérsékleten: [a]*0 = +37° antikoaguláns aktivitás (Codex): 128 NE/mg. A 16. példában kiindulási anyagként alkalmazott benzetónium-heparinátot (a heparin semleges benzetóniumsóját) sertés-nyálkahártyából származó heparinból állítottuk elő, amelynek jellemző tulajdonságai az alábbiak voltak: átlagos molekulasúly: 16 000 dalton fajlagos forgatóképesség vizes oldatban, 20 °C hőmérsékleten: W20D = +44° antikoaguláns aktivitás (Codex): 180 NE/mg. A 17—19. példában kiindulási anyagként alkalmazott heparin-nátriumsót ugyanolyan sertés-nyálkahártyából származó heparinból állítottuk elő. Az 1-16. példában felhasznált észterek nem-szelektívek. A 17—19. példában szelektív észtereket alkalmaztunk. (1. a 973 894 számú brit és a 273 914 számú francia szabadalmi leírást). 10 1B 20 25 1. példa 30 g benzetónium-heparinát 600 ml dimetil-formamiddal készített oldatához 30 g 4-klór-benzil-kloridot adunk. Oldódás után a reakcióelegyet szobahőmérsékleten (20 °C körül) 60 óra hosszat állni hagyjuk, majd __ 600 ml 10%-os metanolos nátrium-acetát-oldatot adunk a reakcióelegyhez. A képződött csapadékot szűréssel elkülönítjük, metanollal mossuk,és vákuumban meg-' szárítjuk. Ily módon 10,75 g heparin-(4-klór-benzil)-észtert kapunk nátriumsó alakjában. Hozam: 50 %. . A kapott észterhez 269 ml 0,4 n vizes nátrium-hidroxid-oldatot adunk,és az elegyet 25 °C hőmérsékleten 2 óra hosszat keverjük. Ezután 0,4 n vizes sósavoldat hozzáadása útján semlegesítjük az elegyet, majd a vizes fázis kétszeres térfogatának megfelelő mennyiségű ^ metanol hozzáadása útján lecsapjuk a terméket. Ily módon, a kapott termék szűréssel történő elkülönítése után 8,46 g depolimerizált heparint kapunk nátriumsó alakjában. 2. példa 30 g benzetónium-heparinát 600 ml dimetil-formamiddal készített oldatához 30 g benzil-kloridot adunk. A teljes oldódás után a reakcióelegyet szobahőmérsékleten 60 óra hosszat állni hagyjuk, majd 600 ml 10%-os metanolos nátrium-acetát-oldat hozzáadása útján a terméket leválasztjuk, szűréssel elkülönítjük, metanollal mossuk,és vákuumban megszárítjuk. Ily módon 11,4 g heparin-benzilésztert kapunk nátriumsó alakjában. Hozam: 40 %. 3 g fenti észterhez 75 ml 0,4 n vizes nátrium-hidroxid-oldatot adunk,és az elegyet 20-25 °C hőmérsékleten 2 óra hosszat keverjük. Ezután a reakcióelegyet 65 0,4 n vizes sósavoldat hozzáadása útján semlegesítjük, és a reakcióelegy kétszeres térfogatának megfelelő menynyiségű metanol hozzáadása útján a terméket leválasztjuk^ szűréssel elkülönítjük. Ily módon 2,23 g depolimerizált heparint kapunk nátriumsó alakjában. 3. példa 10 g benzetónium-heparinát 250 ml diklór-metánnal készített oldatához 10 g benzil-kloridot adunk. Oldódás után az elegyet szobahőmérsékleten 24 óra hosszat állni hagyjuk, majd az oldószert vákuumban elpárologtatjuk. A maradékot 150 ml dimetil-formamidban oldjuk,és 150 ml 10%-os metanolos nátrium-acetát-oldat hozzáadása útján leválasztjuk a terméket, amelyet azután szűréssel elkülönítünk. Dy módon 3,67 g heparin-benzilésztert kapunk nátriumsó alakjában. Hozam: 35 %. 2 g fenti módon kapott észterhez 50 ml 0,1 n vizes nátrium-hidroxid-oldatot adunk,és az elegyet 60 °C hőmérsékleten 2 óra hosszat keverjük. Lehűlés után az oldatot 0,1 n vizes sósavoldat hozzáadása útján semlegesítjük, majd kétszeres térfogatú metanol hozzáadása útján a képződött terméket leválasztjuk,és szűréssel elkülönítjük. Ily módon 1,54 g depolimerizált heparint kapunk nátríumsó alakjában. 4. példa 5 g benzetónium-heparinát 125 ml diklór-metánnal készített oldatához 5 g klór-ecetsav-etilésztert adunk. Oldódás után az elegyet szobahőmérsékleten 3 napig állni hagyjuk, majd az oldószert vákuumban elpárologtatjuk, a maradékot 75 ml dimetil-formamidban oldjuk,és 75 ml 10%-os metanolos nátrium-acetát-oldat hozzáadása útján a terméket leválasztjuk. A kapott csapadékot szűréssel elkülönítjük, metanollal mossuk,és vákuumban megszárítjuk. Ily módon 1,72 g heparin-(etoxikarbonil-metil)-észtert kapunk nátriumsó alakjában.Hozam: 30 % 1,7 g fenti észterhez 43 ml 0,1 n vizes nátriumhidroxid-oldatot adunk,és 60 °C hőmérsékleten 2 óra hosszat keverjük az elegyet. Lehűlés után a kapót oldatot 0,1 n vizes sósavoldat hozzáadása útján semlegesítjük, majd a terméket kétszeres térfogatú metanol hozzáadása útján le választjuk, és szűréssel elkülönítjük. Ily módon 1,33 g depolimerizált heparint kapunk nátriumsó alakjában. 5. példa 10 g benzetónium-heparinát 250 ml dilór-metánnal készített oldatához 10 g 4-klór-benzil-kloridot adunk,és ennek oldódásáig keverjük az elegyet, majd szobahőmérsékleten 24 óra hosszat állni hagyjuk. Ezután az oldószert vákuumban elpárologtatjuk, a maradékot 150 ml dimetil-formamidban oldjuk,és 150 ml 10%-os metanolos nátrium-acetát-oldat hozzáadása útján leválasztjuk a terméket. A kapott terméket szűréssel elkülönítjük, metanollal mossuk,és vákuumban megszárítjuk; ily módon 3,84 g heparin-(4-klór-benzü)-észtert kapunk nátriumsó alakjában. Hozam: 45 %. 2 g fenti észterhez 50 ml 0,1 n vizes nátrium-hidroxid-oldatot adunk,és az elegyet 50 °C hőmérsékleten 2 óra hosszat keverjük. Lehűlés után a reakcióelegyet 0,1 n vizes sósavoldattal semlegesítjük, és kétszeres térfogatú metanol hozzáadása útján a terméket leválasztjuk. A kapott csapadékot szűréssel elkülönítjük, metanollal mossuk,és vákuumban megszárítjuk. Ily módon 1,38 g depolimerizált heparint kapunk nátriumsó alakjában. 6
