188657. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antikoaguláns hatású mukopoliszacharidok előállítására
1 183 657 frakciót egy redukálószerrel kezeljük olyan körülmények között, amelyek a kívánt transzformáció végrehajtását lehetővé teszik. A redukálószert azok közül a reagensek közül választjuk meg, amelyek szokásosan használhatók aldehidcsoportok alkoholcsoportokká való átalakítása céljából. Ezek közül a reagensek közül előnyös egy fém-bór-hibrid használata. A redukálást tehát előnyösen vizes közegben több órás reakcióidővel nátrium- vagy kálium-bór-hibrid jelenlétében hajtjuk végre. Szobahőmérsékleten, előnyösen keverés mellett dolgozva általában elégségesnek bizonyul mintegy 4 órás reakcióidő. A rcakcióelegy pH-értékében növekedés figyelhető meg. Ez a pH-érték 10 körüli értéket is elérhet nátrium-bór-hibrid használata esetén, amikor nátriumhidroxid képződése figyelhető meg. A reakcióba nem lépett bór-hibrid elbontása céljából a pH-értéket sav adagolásával csökkenthetjük. A jelen esetben célszerűnek bizonyul a pH értékét 4 alá csökkenteni például ecetsav adagolása útján. A pH-értéket ezt követően újra beállítjuk a semleges pH-értck körüli értékre, mégpedig 7,5 körüli értékre egy bázis, például nátrium-hidroxid használatával. Az alkohollal kicsapható terméket a reakcióelegyből kicsapjuk és a csapadékot elkülönítjük. Ez a csapadék fogja tartalmazni azokat a láncokat, amelyekben a 2,5-anhidro-D-mannóz végcsoportok 2,5-anhidro-D-mannitol végcsoportokká alakultak át. Az előző bekezdésben említett kicsapást vízmentes etanol adagolásával hajthatjuk végre, előnyösen a reakcióelegy térfogatára vonatkoztatva ötszörös mennyiségű etanolt használva. Az előállítani kívánt redukált termék elkülönítése céljából ezután előnyösen centrifugálást végzünk, a szilárd részt gyűjtve és kívánt esetben mosva, majd szárítva. Az így előállított mukopoliszacharidok vizsgálata során megállapítható, hogy YW/USP titer-arányuk 10 vagy ennél nagyobb, YW-titeijük 200 IU/mg értéknél nagyobb, előnyösen 250 IU/mg értéknél nagyobb. Alternatív módon a 3,5-anhidro-D-mannóz végcsoportok 2,5-anhidro-D-mannonsav szerkezetű végcsopor-' tokká alakíthatók. A 2,5-anhidro-D-mannóz szerkezetű végcsoportokat tartalmazó terméket egy oxidálószerrel kezeljük olyan körülmények között, amelyek biztosítják a kívánt transzformáció végrehajtását. E célra oxidálószerként bármely olyan reagenst használhatunk, amelyet aldehidcsoportok karbonsavcsoportokká alakításához szokásosan hasznosítanak. Közelebbről használhatunk például permanganátokat. A reagáltatást előnyösen vizes közegben a semlegesnél nagyobb pH-értékeken hajtjuk végre. Az aldehidcsoportok karbonsavcsoportokká történő oxidálódásakor a pH értékében csökkenés játszódik le, amelyet előnyös a reakció lefutása során állandó értéken tartani. Szobahőmérsékleten dolgozva a kívánt oxidációs reakció általában 15 órán belül teljes. A képződött termékek a reakcióelegyből alkoholos oldószenei végzett kezelés útján csaphatok ki. A csapadékot előnyösen mossuk és szárítjuk. Megjegyezzük, hogy a korábbiakban, illetve az ezután közölt molekulasúlyokat olyan oldatok retenciós idejének méréséből számítottuk ki, amelyek a vizsgált termékekből előre meghatározott mennyiségeket tartalmaz7 nak. A retenciós idő mérését gélpermeációs vizsgálatokban géloszlopon előre meghatározott eluációs körülmények között végezzük. A molekulasúlyoknak megfelelő értekek logaritmusai ugyanolyan arányosságban vannak a mért retenciós időkkel, mint amilyen arányosságban vannak.a retenciós időkkel a Chrompack (Orsay-les-Ulis) francia cég által forgalomba hozott polisztirol-szulfonsav-nátriumsó standardok 4000-es, 6500-as, 16 000-es és 31 000-es molekulasúlyai ugyanolyan rendszerben, ugyanolyan gélpermeációs körülmények között mérve. Egy gyógyászatilag elfogdható fémkationnal, például nátriumionnal részben vagy egészben sókötésben levő frakciók (tisztítási fokuktól függetlenül) átalakíthatok olyan vegyes vagy egyszerű sókká, amelyek egy másik gyógyászatilag elfogadható fémkationt, például kalciumiont tartalmaznak. Az átalakítást a heparinsók előállítására ismert módszerek valamelyikével, de előnyösen a 73-13580 számú francia szabadalmunkban ismertetett módszerrel végezhetjük. E módszer lényege az, hogy például heparin-nátriumsóból kiindulva az utóbbit egy másik gyógyászatilag elfogadható fémion egy másik anionnal alkotott sójával, például kalcium-ldoriddal reagáltatjuk oldatban, majd ezt követően a heparinhoz nem kötött fémionokat például alkoholos kicsapássaf vagy dialízissel eltávolítjuk. Abban az esetben, ha a kationcsere mértéke nem kielégítő, akkor oldatban az első reagáltatás eredményeképpen kapott vegyes heparinsót további mennyiségű másik sóval, azaz például kalcium-kloriddal reagáltatjuk a kívánt végső helyettesítési foknak megfelelően. A találmányt közelebbről a következő kiviteli példákkal kívánjuk megvilágítani. 1. példa Ebben a példában a heparin részleges depolimerizálását és (II) képletű 2,5-anhidro-D-mannóz szerkezetű, redukáló jellegű végcsoportokat tartalmazó mukopoliszacharid-láncok előállítását ismertetjük. Az említett végcsoport a 6-helyzetben primer hidroxilcsoportot hordoz, amely azonban túlnyomó részt szulfátéit, vagyis R2 jelentése ilyen esetben -SO3 csoport. Ez a tény a 13C-NMR-spektrumban mutatható ki, mégpedig úgy, hogy az -SO3 csoporttal helyettesített 6-helyzetű szénatom rezonanciaszignálja 70 ppm, míg az -OH csoporttal helyettesített 6-helyzetű szénatomé 64 ppm (TSP-re vonatkoztatva). Heparin nyersanyagot ellenőrzött körülmények között salétromossawal kezelünk a következőképpen^ +4 °C-on 3 liter desztillált vízben feloldunk 50 g olyan kereskedelmi minőségű heparint, amelynek YW/USP titer-aránya közel 1 és USP-titere 160 IU/mg. Ezt követően a kapott oldathoz elegendő mennyiségű (10,35 g) nátrium-nitritet adagolunk ahhoz, hogy 0,05 mólos oldatot kapjunk. Az így kapott oldat pH- értékét ezután tiszta sósavoldat adagolásával 2,5-re beállítjuk, majd 4-4 °C-on 10 percen át keverjük. Ezt követően a pH értékét 5 n nátrium-hidroxid-oldattal 7,5-re beállítjuk. Ezt követően ötszörös térfogatmennyiségű, vagyis 15,5 liter tiszta etanol adagolása útján a képződött termékeket kicsapjuk, majd a kivált csapadékot centrifugálással elkülönítjük. Ezután etanollal mossuk, majd nagyvákuumban 60 °C-on szárítjuk. így 60 g terméket kapunk a következő jellemzőkkel: 2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
