188425. lajstromszámú szabadalom • Eljárás B12 vitamint és egyéb korrinoidokat tartalmazó fermentlevek feldolgozására és B12-vitamin koncentrátumok előállítására
1 188 425 2 tóanyagtartalom 22,4%; a kiindulási fermentlé B,2- vitamin-tartalmára számított hozam 77,7%. 5. példa Csatornaiszapból vett vegyes mikroorganizmuspopulációval végzett anaerob fermentációból levett fermentlé 1 m3-jét, amely 25 mg/liter B,2-vitamint • tartalmaz és vízre vonatkoztatott relatív viszkozitása 1,5, 200 liter óránkénti sebességgel átvezetünk három egymás után kapcsolt mozgóágyas gyantaoszlopon, amelyek mindegyike 10-10 liter DIAION HP-21 adszorpciós gyantát tartalmaz. Az átfolyt lé a fermentléhez viszonyítva világos színű és nem kellemetlen szagú, relatív viszkozitása 1,1. Az így előtisztított fermentléből szeparálással elkülönítjük a biomasszát, majd a sűrítményt porlasztószárítással megszárítjuk. A kapott száraz termék súlya 2Q 9,5 kg, B12-vitamin-tartalma 22,5 g, fajlagos aktivitása 2370 mg/kg. 6. példa 25 Az 1. példában leírt módon előállított vizes koncentrátumot az alábbi módon dolgozzuk fel humán terápiás célra alkalmas B12-vitamin-kristály előállítására: t on 10 liter vizes koncentratumhoz, amely összesen 45,2 g B12-vitamint és 7,3 g III-faktort tartalmaz, szárazanyagtartalma 331 g, 200 ml elfolyósított fenolt adunk, majd 2 liter 1 : 6 arányú fenol-kloroform eleggyel kivonatoljuk. A szerves fázist elválasztjuk és 1 liter 1 : 6 arányú fenol-kloroform 35 eleggyel ismét kivonatoljuk a vizes fázist. Az elválasztott szerves fázisokat egyesítjük és 1,5 liter 2% fenolt tartalmazó vízzel átmossuk. A vizes mosófolyadékot egyesítjük az 1 : 6 arányú fenol-kloroform eleggyel végzett kivonás után maradt vizes fázissal. 40 A B12-vitamint tartalmazó fenol-kloroformos oldathoz azonos térfogat, azaz 3 liter acetont és 1500 ml vizet adunk és ezzel a B12-vitamint a vizes fázisba visszük át. A vizes fázist elválasztjuk és 200-200 ml vízzel a szerves fázist kétszer extrahál- 45 juk. Az egyesített vizes oldatból 1 liter kloroformmal kivonatoljuk a fenol-nyomokat. Az így kapott vizes oldat térfogata 2100 ml, B^-vitamin-tartalma 21,7 g (az elméleti hozam 48%-a), a papírkromatográfiás vizsgálatok szerint más kobalamin-50 faktort csak nyomokban (1% alatt) tartalmaz. A vizes oldatot vákuumban kb. 500 ml-re bepároljuk és 3000 ml aceton hozzáadásával ismert módon kristályosítjuk. 18,1 g kristályos B12-vitamint ka- _ punk, amelynek cianokobalamin tartalma 90,0%. 55 A kristály-anyalúgból lepároljuk az acetont, a vizes maradékot egyesítjük az 1 : 6 arányú fenolkloroform eleggyel végzett extrakció vizes fázisával, a fenol-kloroform elegy vizes mosófolyadékával és a kristály-anyalúg vizes oldatával. A 12 liter térfogatú elegyet kétszer 20 térf.% kloroformmal kivonatolva fenolmentesítjük, majd bepároljuk és porlasztva szárítjuk. Az így kapott másodtermék hatóanyag tartalma 24,4 g B,2-vitamin és 6,5 g III- faktor. Ez a termék megfelel a B12-vitamin „feed grade” minőségi követelményeinek. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás B12-vitamint és egyéb korrinoidokat tartalmazó fermentlevek feldolgozására és B,2- vitamin-koncentrátumok előállítására, azzal jellemezve, hogy a feltáratlan mikoorganizmus-sejteket tartalmazó fermentlevet 1(T8- 10“7 m pórusméretű, legalább 10“4 m szemcseátmérőjű, legalább 200 m2/g fajlagos felületű, nem-ionos makroretikuláris adszorpciós gyantával egyszer vagy többször kezeljük, majd a) a sejtek ismert módon történő feltárása után a levet 1(T8 — 10~7 m pórusméretű, legalább 10 4 m szemcseméretű, legalább 200 m2/g fajlagos felületű nem-ionos adszorpciós gyantával kezeljük, az elkülönített gyantát adott esetben 8 és 12 közötti pH- értékű vizes bázissal kezeljük, majd a gyantán megkötött B12-vitamint és egyéb korrinoidokat ismert módon, célszerűen vízzel elegyedő és adott esetben víztartalmú szerves oldószerrel eluáljuk a gyantáról, és kívánt esetben ismert módon kristályos B12- vitaminná és/vagy Bi2-vitamin-tartalmú takarmányadalék-készítménnyé dolgozzuk fel, vagy b) feltáratlan biomasszát tartalmazó takarmányadalék előállítása esetén az adszorpciós gyantától elkülönített fermentléből a feltáratlan biomasszát elkülönítjük és megszárítjuk. 2. Az 1. igénypont a) pontja szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a feltáratlan sejteket tartalmazó fermentlé adszorpciós tisztítására és a feltárt fermentlé B12-vitamin tartalmának adszorpciós megkötésére azonos típusú gyantát alkalmazunk. 3. Az 1. igénypont a) pontja szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a feltáratlan sejteket tartalmazó fermentlé adszorpciós tisztítására és a feltárt fermentlé B12-vitamin-tartalmának adszorpciós megkötésére egymástól eltérő típusú adszorpciós gyantákat alkalmazunk. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a feltáratlan sejteket tartalmazó fermentlé adszorpciós tisztítását két lépcsőben, azonos vagy egymástól különböző típusú adszorpciós gyantával végezzük. 5. Az 1. igénypont a) pontja szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a B12-vitamint megkötve tartalmazó adszorpciós gyanta mosására 8-12 pH- értékű ammónium-hidroxid vagy alkálifém-hidroxid-oldatot alkalmazunk. Ábra nélkül Kiadja az Országos Találmányi Hivatal A kiadásért felel: Himer Zoltán osztályvezető Szedte a Nyomdaipari Fényszedő Üzem (877648/09) 87—1775 Dabasi Nyomda, Budapest—Dabas Felelős vezető: Bálint Csaba igazgató
