188298. lajstromszámú szabadalom • Eljárás humánproteineket tartalmazó véralvadás-fokozó gyógyászati készítmény előállításáar
1 188 298 2 2. Folyamatábra Eljárás véralvadás-fokozó készítmény előállítására humán-proteinekből (a jelen találmány szerinti eljárás) FEIBA-generálás kaolin vagy celit (kovasavgél) nélkül Kryo-maradék] (= humán citrátplazma-Kryocsapadék) 2. példa FEIBA -generálás dextránszulfát (10 mg/1) FEIBA generálószerként (15 perc/4 'Q izolálás ill. PK-faktorok* dúsítása izolálás ill. a generált FEIBA és a PK faktorok dúsítása DEAE-Sephadex maradék (Gamma-globulin és albumin kinyerésére rövid keverés DEAE-Sephadex-szel (0,5 g/l, 30 perc/4 °C) a PK faktorok adszorpciója céljából Kryomaradék rövid keverés PK-faktorok DEAE-Sephadexen generált FEIBA-val DEAE-Sephadexadszorbeálva, Kryo maradékban szel szuszpendálva perc/4 °C) majd azonnal centrifugálás és szűrés FEIBA generálása DE A E-Sephadexen FEIBA-PK faktorok DEAE-Sephadexen adszorbeálva 2 mosás és eluálás FEIBA + PK faktorok 12 óra/4 °C állás „érintkezési idő" majd centrifugálás vagy szűrés DEAE-Sephadex maradék (Gamma-globulin és albumin kinyeréséhez) * PK-faktor = protrombinkomplexfaktorok Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás új humánprotein bázisú II, VII, IX és X alvadási faktort tartalmazó és VIII faktor-inhibi- 45 tor-bypass-aktivitással rendelkező véralvadás fokozó gyógyszerkészítmény előállítására, amely- a Wessler-féle trombózist előidéző tesztben a nyúl 1 kilogrammjára számítva legalább 2 VII faktor-inhibitor-bypass aktivitásig trombogén aktivi- 50 tás mentes,- milliliterenként legalább 10 egységig terjedő VIII faktor-inhibitor-bypass - aktivitással rendelkező készítmény vizes oldatában mérve kallikreinaktivitás mentes és prekallikrein-aktivátor-aktivi- 55 tás mentes,- dextránszulfát-agarózon nátrium-klorid gradienssel affinitás kromatográfiásan az alacsonyabb nátrium-klorid-koncentrációnál eluáló IX faktor aktivitású proteinre és VIII faktor-inhibitor-bypass 60 aktivitású proteinre szétválasztható és- amelyben a IX. faktor aktivitású proteint és VIII faktor-inhibitor-bypass-aktivitású proteint tartalmazó eluátumok elektroforetikusan elválasztható a- és ß-globulint tartalmaznak, és a szétválasztási görbe az a-tartományban 60-80% összproteinnek megfelelő főcsúcsot, és egy ehhez kapcsolódó, az összprotein 10-20%-ának megfelelő vállat, valamint a ß-globulin-tartomänyban a vállformájú görbéhez kapcsolódó gyengén határozott, az összprotein 10-20%-ának megfelelő csúcsot mutat - a humánplazma vagy más plazmafrakció generáló szerrel történő kezelésével és a generált VIII faktorinhibitor-bypass aktivitással rendelkező proteinelegy adszorbeálásával, eluálásával és koncentrálásával, azzal jellemezve, hogy a humánplazmát vagy más plazmafrakciót a) két lépésben először szulfatált magas polimerizáltsági fokú szénhidráttal, majd bázikus dextrán-bázisú ioncserélővel rövid ideig kezelve generáljuk, vagy b) a humánplazmát egy egylépcsős eljárásban csak egy bázikus, dextrán-bázisú ioncserélővel kezeljük legalább 2 óra hosszat és izotóníás sókkal elegyítjük, majd ismert módon eluáljuk és koncentráljuk. , 88 0780 — Dallasi Nyomda, Budapest — Dallas ' 0 raJ/ Felelős ve/elö: Bálim Csaba igazgató Kiadja az Országos Találmányi Hivatal A kiadásért felel: Himer Zoltán osztályvezető Szedte a Nyomdaipari Fényszedő Üzem (877359/09) 9
