188298. lajstromszámú szabadalom • Eljárás humánproteineket tartalmazó véralvadás-fokozó gyógyászati készítmény előállításáar
1 188 298 2 Az ITI-koncentrációt mg %-ban (mg/100 ml) adjuk meg. Az 1. és 2. példák szerint előállított készítmények a fent leírt meghatározási módszer szerint az alábbi értékeket mutatják: Az 1. és 2. ábra adatai megfelelnek az alábbi 2. példa affinitáskromatográfiával és elektroforetikus elválasztással kapott adatainak. * 4 FEI BA-készítmény 1. példa szerint 2. példa szerint előállítva FEIBA-egységek/ml 26,0 24,2 II faktor-egységek/ml 25,8 23,0 VII faktor-egységek/ml 24,0 26,5 IX faktor-egységek/ml 28,2 27,4 X faktor-egységek/ml 24,1 22,1 Trombogén aktivitás a Wessler-tesztben trombogén hatás mentes... dózisig 10 FEIBA-E/kg 4 FEIBA-E/kg Affinitáskromatográfia a dextránszulfát-sepharoz-on IX F-aktivitás eluálva 0,14-0,40 m NaCl 0,13-0,50 m NaCl maximális IX F-aktivitásnál eluálva 0,31 m NaCl 0,30 m NaCl FEIB-aktivitás eluálva 0,33-0,49 m NaCl 0,31-0,50 m NaCl maximális FEIB-aktivitás eluálva 0,41 m NaCl 0,40 m IX F protein és FEIB-aktivitású protein elektroforetikus felosztása a-globulin, föcsúcs 67% 70% a-globulin, mellékcsúcs 16% 14% ß-globulin 17% 16% Kallikrein-aktivitás 0 0 Prekallikrein-aktivátoraktívitás 0 0 FEIBA maradékaktivitás% 1 óra inkubálás után a VIII F inhibitor-plazmában 65% 57% IX faktor tnaradékaktivitás% 1 óta inkubálás után a IX F-hiányplazmában 60% 55% 1 nter-alfa-tripszininhibi-0,2 0,6 mg/FEIBA-E mg/FEIBA-E A találmány szerinti készítményt összevetettük a 4 160 025 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásunk szerinti készítménnyel. A tesztek leírása az alábbiakban következik. Friss fagyasztott plazmát 4 °C-on megolvasztottunk és a Kryo-csapadékot elválasztottuk. A Kryo-felülúszóhoz 5 g/liter kaolint adtunk és természetes (7,8) pH-nál kevertük. Ennek hatására a kaolin elkülönült és a kapott VlII-inhibitorbvpassing-activity aktivitású faktort tartalmazó anyagot a protrombin-komplex II, VII, IX és X faktoraival együtt DEAE-Sephadex ioncserélőn adszorbeáltuk, a fenti szabadalmi leírásban közölt módon folytattuk az eljárást. összehasonlítás céljából a jelen bejelentés 2. példáját reprodukáltuk. A FEIBA egységek meghatározása után mindkét terméket Wessler-féle trombózist előidéző hatásteszttel vizsgáltuk Mindkét esetben 2 FEIBA egységet vizsgáltunk testsúlykilogrammonként 3 nyúlon és az alábbi eredményeket kaptuk: Az AEÁ-beli szabadalmi leírás szerinti FEIBA készítmény 3 = két vagy több nagy rög 4 = egyetlen rög tölti ki az egész izolált vénaszegmenst 1 = néhány makroszkopikusan látható fibrin részecske Találmány szerinti FEIBA készítmény 0 = nincs alvadék 0 = nincs alvadék 0 = nincs alvadék A vazoaktivitásért felelős kallikrein- és prekallikrein-aktivátor hatást is meghatároztuk. Az irodalom szerinti készítmény kallikrein-hatása 10 FEIBA egység/ml-nél 0,007 AOD/min, míg a találmány szerinti készítmény AOD/min értéke < 0;001. A 10 FEIBA egység/ml-t tartalmazó AEA-beli szabadalmi leírás szerinti készítmény prekallikrein-aktivitása 5% BoB-Standard és a találmány szerinti készítménynél az aktivitás 0. Az affinitási kromatogramokat is összevetettük. Az 1. ábrán látszik a találmány szerinti készítmény eluciós görbéje, az irodalom szerinti készítmény eluciós görbéjét az A) ábra mutatja. A két termék közötti különbség nyilvánvaló, a maximum IX faktor aktivitás egyidejűleg eluálódik a maximum FEIB-hatás a prekurzor készítmény esetében, míg a találmány szerinti készítmény esetében a maximum IX faktor előbb eluálódik, mint a maximum FEIB- aktivitás. Az összevetés nemcsak a különbségeket mutatja, hanem a nem-kívánt trombogén és vazoaktív mellékhatásokat csökkentő hatásokban rejlő előnyt is kimutatja. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 I
