188189. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a természetben előforduló ergolén vázas alkaloidokat, főként ergokornint és ergokriptint együttesen tartalmazó drog parazita módon történő előállítására
1 188 189 2 24 *C-on 12-16 nap múlva 1-1,5 cm átmérőjű, fehér, lapos, éles szélű légmiceliumos telepeket alkot. 10—12 nap múlva konidiumképzés indul meg, amelynek mérete 1-4 p. Idősebb korban a telepek középső része a táptalaj felé kissé behúzódik. b) Pepton-glükózos, ill. tripkazin-glükózos szubmerz táptalajon dúsan növő, köteges 1-2 p átmérőjű elágazó miceliumot hoz létre, amelyről 4-5 nap múlva konidiumspórák fűződnek le. c) Mannit-citrátos szubmerz táptalajon (amelynek összetételét a példában adjuk meg) dúsan növő köteges 1,5-2 p átmérőjű, kissé elágazó micéliumot képez, amelyen 38-40 órától nagy tömegben konidiumspórák fűződnek le. Az itt kialakult spórák mérete átlagban 2,5 p. Példa Az OKI-nál 00206 szám alatt deponált törzs 24 napos maláta-agar (összetétel: 6 s% maláta, 2 s% agar-agar, hőfok: 24 °C) tenyészetével 5 1-es üvegfermentorban az alábbi összetételű táptalajt oltottunk be: malátakivonat 3 s%, pepton 1,5 s%, glükóz 1,0 s% A táptalaj pH-értéke: 5,8 Az inkubálát 24 °C-on, 440 ford/perc keverés mellett, 0,5 1/perc levegőztetéssel 3 napig végezzük. A fentiek szerint kapott tenyészettel 10 1 alábbi összetételű táptalajt oltottunk be: mannit 5,0 s%, citromsav 0,7 s%, kukoricalekvár (50% szárazanyagra számolva) 0,1 s%, kálium-dihidrogénfoszfát 0,025 s%, magnézium-szulfát 0,025 s% Az inkubálást 24 °C-on, 230 ford/perc keverés mellett, 1,0 1/perc levegőztetéssel 4,5-5,0 pH-értéken 6 napig végezzük. A pH-értéket ammóniumhidroxid oldat adagolással tartottuk a megadott tartományon belül. A fermentlé spóraszáma: 5,5 • 108 spóra/ml. A biomasszát elválasztottuk, majd nátriumglutamátot tartalmazó malátakivonattal dúsítottuk, palackoztuk és mélyhűtve tároltuk. Az oltóspóra készítmény spóráinak csíraképessége 97%. A készítménnyel, amelyet 30 000 spóra/ mm3 koncentrációra hígítottunk, kalászolás előtti stádiumban levő rozsot fertőztünk. A kísérleti parcellák mérete 30 m2. A fertőzést kézi fertőzőlapokkal végeztük. A termést kézzel, veszteségmentesen gyűjtöttük be. A betakarításból ha-ra számítva 250 kg drogot nyertünk. A drog zsírtartalma 15%. Ergokorninergokriptin tartalom: 9 mg/g. Ergokornin-ergokriptin arány: 50,5 : 49,5%. Az alfa-ergokriptin : béta-ergokriptin aránya = = 54,3-45,7. A kísérleti parcellák termésének jellemzőit az alábbi táblázatban foglaltuk össze: Táblázat Törzs deponálási száma OKI OKI 00223 00206 Ezer szem súly g 160 180 Ergokornin-ergokriptin mg/g 3,0 9,0 Terméshozam kg/ha 150 250 Alkaloid g/ha 450 2250 Ergokornin g/ha 247,5 1136 Alfa-ergokriptin g/ha 54,67 604,76 Béta-ergokriptin g/ha 147,8 508,90 A táblázatból kitűnik, hogy a találmányunk szerinti törzs- fajlagos (g/ha) összalkaloid hozama kiemelkedően nagy,- az összalkaloid hozamon belül is jelentősen magas a béta-ergokriptin tartalom,- ez utóbbi tulajdonság - tapasztalataink szerint - a feldolgozás során jelent előnyt, mert az optimálisnak tekintett béta-ergokriptin : alfa-ergokriptin : : ergokornin 1:2:3 arányhoz juthatunk. Szabadalmi igénypont Eljárás a természetben előforduló ergolén-vázas alkaloidokat, főként ergokornint és ergokriptint együttesen tartalmazó drog előállítására rozsra virulens Claviceps purpurea törzs spóratenyészetével, azzal jellemezve, hogy mikroorganizmus törzsként az Országos Közegészségügyi Intézetnél 00206 szám alatt deponált Claviceps purpurea törzset alkalmazunk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Ábra nélkül
