187835. lajstromszámú szabadalom • Eljárás (amido)-N-helyettesített bleomicinek és savaddiciós sóik előállítására
1 187 835 2 amino-propil-amin, 3-(6-amino-hexil-amino)propil-amin, 3-trimetil-ainino-propil-amin, 3-(3-dimetil-amino-propil-amino)-propil-amin, 3-(3-amino-propil-amino)-propil-amin, 3-[N-metil-N-(3- amino-propil)-amino]-propil-amin, 3-pirrolidinilpropil-amin, 3-piperidinil-propil-amin, 3-piperazinil-propil-amin, 3-[4-(3-amino-propil)-piperazinil]propil-amin-3-(3-pirrolidinil-propil-amino)-propilamin, 3-(3-piperidinil-propil-amino)-propil-amin, 3-(3-hidroxi-propil-amino)-propil-amin, 3-(3-metoxi-propil-amino)-propil-amin, 3-benzil-aminopropil-amin, m-amino-metil-benzil-amin, p-aminometil-benzil-amin, 2-ciklopentil-amino-etil-amin, 3-ciklohexil-amino-propil-amin, 4-ciklohexilamino-butil-amin, cikloheptil-amino-propil-amin, 3-ciklo-oktil-amino-propil-amin, 3-[N-metil-3-N(ciklooktil-metil-amino-propil)-amino]-propilamin, 3-ciklodekanil-metil-amino-propil-amin, 3- {N-metil-N-[3-(2-p-klór-fenil-etil-amino)-propil]amino}-propil-amin, 3-{N-metil-N-[3-(m,p-dibenzil-oxibenzil)-amino-propil]-amino}-propil-amin, 3-{N-metil-N-[3-(p-ciano-benzil-amino)-propil]amino}-propil-amin, 3-{N-metil-N-[3-(cikloundekanil-metil-amino)-propil]-amino}-propil-amin, 3- {N-metil-N-[bisz(m,p-dibenzil-oxi-benzil)-aminopropil]-amino}-propil-amin, 3-{N,N-dimetil-N-[3- (dibenzi1-amino)-propil]-amino}-propil-amin, 3-{N,N-dietil-N-[3-(dibenzil-amino)-propil]-amin o}-propil-amin, 3-{N,N-dimetil-N-[3-(N,N-dimetil- N-(3-dibenzil-amino-propil)-amino)-propil]amino}-propil-amin, 3-{N,N-dimetil-N-[3-(N,N- dimetil-N-(3-ciklooktil-metil-amino-propil)amino)-propil]-amino}-propil-amin, 3-[4-(3-dibenzil-amino-propil-amino)-piperidil]-propil-amin és 3-[4-(3-ciklooktil-metií-amino-propil)-piperidil]propil-amin. A (VIII) általános képletű aminok közül azok, melyek egyúttal a (IX) általános képletű vegyületek körébe is beletartoznak - a képletben A' jelentése (21) vagy (22) általános képletű csoport, melyekben R10., 1-4 szénatomos alkil- és Ru,, 1-4 szénatomos alkil- vagy benzilcsoport, és B' jelentése (23) általános képletű csoport, melyben R12., jelentése adott esetben a fenilcsoporton egy vagy több halogénatommal, egy vagy több cianocsoporttal vagy egy vagy több benzil-oxi-csoporttal vagy egy vagy több 5-13 szénatomos cikloalkilcsoporttal helyettesített 1-4 szénatomos alkilcsoporttal helyettesített fenil(1-4 szénatomos)-alkil-csoport - új vegyületek, e találmány feltalálói szintetizálták ezeket először. E vegyületek előállítása során a (X) általános képletü vegyületet - a képletben A' és B' jelentése az előzőekben megadott, Y védett aminocsoportot jelent - a védőcsoport eltávolítása céljából hidrolizáljuk. Bár a hidrolízis akár sav, akár bázis jelenlétében lezajlik, előnyösen hidrogén-kloriddal végezzük a hidrolízist. A (X) általános képletű kiindulási anyagok közül azokat, amelyek a (XI) általános képletű vegyületek körébe is beletartoznak - a képletben R10., és Ru,, és Y jelentése az előzőekben megadott, mind R,r mind Rn. fenil-(l—4 szénatomos)-alkil-csoportot jelent - a következő eljárás szerint állítjuk elő. Valamely (XII) általános képletű 3-aminopropil-N,N-dialkil-amint - a képletben Rl0. és Rn. jelentése az előzőekben megadott - benzaldehiddel vagy fcnil-(l-4 szénatomos)-aldehiddel redukciós kondenzálásnak teszünk ki. A reakcióelegyet meglúgosítjuk, szerves oldószerrel extraháljuk, így a (XIII) általános képletű N',N'-dibenzil-aminopropil-N,N-dialkil-amint nyerjük - a képletben R,0., R,r, Rir és R,j. jelentése az előzőekben megadott. A kapott amint 3-halogén-propil-N-(védett)aminnal reagáltatva a (XIV) általános képletű kvarterner sót nyerjük - a képletben Y, R|0., Rir, R]r és Ru. jelentése az előzőekben megadott. A kvaierner sót sav, például 6 n hidrogén-klorid jelenlétében szobahőmérséklet és 200 °C közötti hőmérsékleten, például 110 °C-on, 8 órán át hidrolizáljuk. A melléktermékek, például a sav, eltávolítása után a reakcióelegyet bepároljuk, így a (XI) általános képletű vegyület hidrogén-kloridját kapjuk. A (XV) általános képletű vegyületeket - a képletben Y jelentése a fenti, B" jelentése di[fenil-(rövidszénláncú)alkil]-amino-, p-ciano-fenil-(rövidszénláncújdkil-amino-, 5-11 szénatomos cikloalkilcsopoittal helyettesített rövidszénláncújalkilamino- vagy bisz[dibenzil-oxi-fenil-(rövidszénláncú)alkd]-amino-csoport - úgy állítjuk elő, hogy bisz(3-amino-propi!)-(rövidszénláncú)alkil-aminból ekvivalensnyi vagy ennél kisebb mennyiségű acilezőszerrel, például benzoil-kloriddal, acetilkloriddal, ecetsav-anhidriddel, karbobenzoxikloriddal, S-terc-butoxi-karbonil-4,6-dimetil-2- merkapto-pirimidinnel vagy N-karbetoxi-ftálimiddel, monoacilezett származékot hozunk létre, a kapott származékot aldehiddel reduktiven kondenzáljuk, ha B" jelentése egy helyettesítővel rendelkező arr.inocsoport egy ekvivalens aldehidet, ha B" jelentése két helyettesítővel rendelkező aminocsoport, 2 vagy több, előnyösen 3-6 molekvivalens aldehidet alkalmazunk, majd az acilcsoportot sósavval lehidrolizáljuk. A találmány szerinti eljárással előállított tipikus (amido)-N-helyettesített bleomicinszármazékok fiziokémiai jellemzőit a 2. táblázatban ismertetjük. A találmány szerint előállított termékek tipikus vegyü'etein vizsgált biológiai sajátságokat a következőkben ismertetjük. 1. I laktiváló enzim elleni rezisztencia vizsgálata (1) Inaktiváló enzim extrahálása Donryu törzsbeli hím patkányok máját a májsúly kétszeresét kitevő pH-7,0 1/15 mol/1 foszfátpufferrel elegyítjük és aprítva szövetemulziót készítünk belőle. A kapott emulziót 105 000 g-on 60 percig centrifugáljuk. A felülúszót dializáljuk és a kapott nagy molekulatömegü frakciót inaktiválóenzim extraktumként használjuk. (2) Az inaktiválási reakció vizsgálata l ml, az (1) pont szerint előállított extraktumhoz 1 ml, 8 mg bleomicinszármazékot tartalmazó szubsztrátoldatot adunk. Az elegyet 37 °C hőmérsékleten 40 percig reagáltatjuk. A reakcióelegy 0,3 m;-es részletéből eltávolítjuk a fehérjét és megvizsgáljuk a maradék aktivitását Mycobacterium smegmatis ATCC 607-re vonatkozóan. Az azonos körülmények között kontrollként alkalmazott bleorricin B2 50%-os aktivitáscsökkenést mutat. A vizsgálat eredményeit a 3. táblázatban ismertet-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
