187835. lajstromszámú szabadalom • Eljárás (amido)-N-helyettesített bleomicinek és savaddiciós sóik előállítására
1 187 835 2 7. Táblázat Szintetizált (arr.ido)-N-helyettesített bleomicinsav A réztartalmú forma UV abszorpciós maximuma mp (E 1 "1 cm) A réztartalmú forma vékonyrétegkromatográfiával kapott R, értéke *1 A réztartalmú forma elektroforézissel kapott Rm értéke (alanin Rm értéke 1,0) *■) (Amido)-N-[3-(/S/-l'-fenil-etil-amino)-245 (121) 0,93 0,84 propilj-bleomicinsav 293 (119) 0,62* (Amido)-N-(3-dibutil-amino-propil)-bleomi-247 (123) 0,93 0,88 cinsav 294 (123) 0,62* (Amído)-N-(oktil)-bleomicinsav 245 (130) 0,79 0,59 293 (128) 0,20* Megjegyzés: *1 „Silica Gel 60F 254 SilanisedR” (Merck Co.); metanol, 6%-os ammónium-acetát-oldat 60 : 40 térfogatarányú elegyében mérve, kivéve a csillaggal jelölt Rr értékeket, melyeket 65 : 34 térfogatarányú elegyben mértünk. *2 Avicel SFR (FMC Co.); hangyasav-ecetsav-víz (27 : 75 : 900 térfogatarányú elegye) 800 V, 15 perc. tesítjük, majd liofilizáljuk. 83%-os hozammal 980 mg réztartalmú 3t[N-3'-(ciklooktil-amino)propil-N-metil-amino]-propil-amino-(amido)-N[3-(/S/-l'-fenil-etil-amino)-propil]-bIeomicint nyerünk kék amorf por formájában. C lépés 980 mg B lépés szerinti eljárással előállított réz- 35 tartalmú 3-[N-(3'-ciklooktil-metil-amino)-propil- N-metil-amino]-propil-amino-(amido)-N-[3-(/S/-l'fenil-etil)-amino-propil]-bleomicint 22 ml desztillált vízben oldunk. Az oldatból a rezet az 1. példában ismertetett eljárással, Amberlite® XAD-2 és 40 5%-os EDTA.2Na oldat alkalmazásával, eltávolítjuk. Az oszlopról elfolyó oldatot liofilizáljuk. 92%os hozammal 870 mg rézmentes 3-[N-(3'-ciklooktilmetil-amino)-propil-N-metil-amino]-propilamino-(amido)-N-[3-(/S/-r-fenil-etil-amino)- 45 propilj-bleomicin-hidrogén-kloridot nyerünk színtelen amorf por formájában. UV abszorpciós maximum és (E 1%/1 cm) desztillált vízben 291 mp (89). Infravörös abszorpciós maximum kálium-bromid tablettában mérve 3400, 2925, 1720, 1650, 1550, 50 1520, 1480, 1460, 1450, 1405, 1385, 1360, 1320, 1255, 1190, 1130, 1100, 1055, 1020, 980, 960, 880, 805, 760, 725 és 695 cm"1. A többi fizikokémiai jellemzőt a 2. táblázatban ismertetjük. 3. példa A lépés A 2. példában leírtakhoz hasonlóan 1,5 g, az 1. 60 példa szerinti eljárással készült, réztartalmú dezamido-bleomicint 60 g Fusarium roseum tenyészetből származó micélium és 750 ml pH 7,5-ös, 1/ 20 mol/1 foszfátpuffer homogén elegyével keverünk össze. Az elegyet 37 °C hőmérsékleten 21 órán át 65 reagáltatjuk. Ezután a reakcióelegyet a 2. példában leírt módon kezeljük és 500 ml térfogatú, Amberlite XADK-2 gyantával töltött oszlopon engedjük át, melyen a kívánt anyag megkötődik. Az oszlopot 750 ml desztillált vízzel mossuk, majd víz, metanol 4 : 1 arányú elegyével eluáljuk. Az összesen 750 ml térfogatú zöld frakciót összegyűjtjük és csökkentett nyomáson bepároljuk. A koncentrátumot 60 ml térfogatú, nátrium típusú CM-Sephadex11 C-25 gyantával (Pharmacia Fine Chemicals Co.) töltött, pH 4,5-ös 1/20 mol/l-es ecetsav, nátrium-acetát puffern;] ekvilibrált oszlopra visszük. Az oszlopot desztillált vízzel mossuk, és az oszlopról elfolyó, összesen 80 ml térfogatú kék színű frakciókat öszszegyűjtjük. A CM-Sephadex® gyantán végzett kromatografálást megismételjük, majd a tisztított kékszínü frakciókat bepároljuk és 1 liter térfogatú, 1 : 4 arányú víz, metanol eleggyel készített Sephadex® LH-20 gyantával (Pharmacia Fine Chemicals Co.) töltött oszlopon engedjük át. A kifejlesztést 1 : 4 arányú víz, metanol eleggyel végezzük, az oszlopról elfolyó kék színű frakciókat gyűjtjük. Az egyesített kék színű frakciókat csökkentett nyomáson bepároljuk, majd liofolizáljuk. 87%-os hozammal 890 mg réztartalmú dezamido-bleomicinsavat nyerünk kék amorf por formájában. UV abszorpciós maximum és (E 1%/1 cm) desztillált vízben mérve 254 mp (143) és 292 mp (144). Infravörös abszorpciós maximum kálium-bromid tablettában mérve 3450, 2975, 2940, 1720, 1640, 1560, 1465, 1420,1380, 1280, 1190, 1140, 1100, 1060, 1020,990, 880, 810 és 775 cm"1. A 7. táblázatban megadott körülmények között vékonyrétegkromatográfiával kapott Rr érték 0,91* és az elektroforézissel kapott Rm érték 0,49. B lépés 500 mg, az A lépés szerinti eljárással kapott réztartalmú vegyületet és 2,010 mg HOBT-t 5 ml dimetil-formamidban oldunk. A kapott oldatot 3-(/S/-l'-fenil-etil-amino)-propil-aminnal 21 órán át 17
